| 查看: 980 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
DNA的吸光值，疑惑
|
|||
| 提取DNA后测了浓度，稀释后就做PCR了。刚开始做的很顺利，都能跑出条带，后来再过重复就跑不出条带了。把所有的东西都换了一遍只有DNA 没有换，还是没跑出来。后来重新测了一下浓度，发现浓度都降低了，而且最主要的是OD值，原来刚提出来的时候测得都是1.8多，比较纯的，现在再测都是1.3~1.7之间 或者是1.9~2.2之间，P.S. 师兄帮我选的是230nm。DNA的OD值主要应该是看OD260/280吧，那od 260/230呢？惭愧，做了真么长时间的分子了，这一点总是搞不清楚。 |
回复此楼» 猜你喜欢
三甲基碘化亚砜的氧化反应
已经有4人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有12人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
-
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有3人回复
-
论文投稿，期刊推荐
已经有4人回复
-
硕士和导师闹得不愉快
已经有13人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
xiangshengyan
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 贵宾: 0.35
- 金币: 4075.7
- 红花: 1
- 帖子: 523
- 在线: 88.1小时
- 虫号: 30691
- 注册: 2003-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2009-11-29 05:58:16
3楼2009-11-29 10:06:17
lzhwin
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1977.1
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 489
- 在线: 58.1小时
- 虫号: 481076
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 11-29 19:27
amisking(金币+5,VIP+0): 11-29 19:27
|
A 260 / A 280 的比值，用于评估样品 的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。（320差不多也就是那条曲线刚下降到0的时候）。 所以，当我们检测260/280后，如果比值在1.8-2.0之间时，我们可以说其纯度可以，那OD260的值就有效。否则，OD260的值判为无效。你说的嘌噙与嘧啶的吸光值，确实没错。但一般情况下，我们测的都是基因组、tRNA，mRNA、cDNA，所以其CG含量都比较均匀。都适用于这种方法。然而，在测某些CG含量明显不均匀的情况下，比如人工合成的寡核苷酸、引物，在CG含量过大或者过小的情况下，我们就不能用260/280的方法了。不过一般自已合成的引物，都能保证纯度的，买来的引物，或者托公司合成的寡核苷酸，也不需要我们用OD值方法重新测一下。因为产品包装上写着多少个OD，序列长度，都非常详细，纯度也是有保证的。 |
4楼2009-11-29 14:05:25
5楼2009-11-30 05:36:16
seahow
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1691.1
- 红花: 1
- 帖子: 1778
- 在线: 65.2小时
- 虫号: 78970
- 注册: 2005-07-07
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
6楼2009-11-30 08:07:30
7楼2009-12-01 11:09:16