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如何判断外源蛋白形成包涵体
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如何判断挂在表达载体上的外源片段被诱导表达后是否形成包涵体？ 我需要的是可溶性的目的蛋白； 菌体超声破碎后没有澄清，有人建议破碎离心后，上清和沉淀分别跑蛋白胶，但具体步骤如何进行，恳请大家指点一下啊！ |
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5楼2009-11-29 12:40:33
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amisking(金币+2,VIP+0): 11-29 08:54
tutufei(金币+10,VIP+0):辛苦了，多谢 12-8 14:33
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tutufei(金币+10,VIP+0):辛苦了，多谢 12-8 14:33
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1.破碎后上清液加上样缓冲液当然需要沸水煮的，是变性胶呀！要区别清楚变性和非变性胶哦 2.如果沉淀直接加上样缓冲液，沸水煮后会有变性的目的蛋白释放出来，离心后用上清跑变性胶，这样效果不好的，因为上样缓冲液不一定能把包涵体（如果是的话）溶解完全。 3.尿素就是使包涵体变性了嘛，这要搞清楚，蛋白变成单肽了。 4.一般情况下我们判断外源蛋白是否形成包涵体，在完全破胞后离心取上清跑变性胶，如果有目的蛋白出现，至少说明有可溶成分的； 5.细胞残渣再用8M尿素处理后离心取上清跑变性胶，没有出现目的蛋白的话，再一次说明你的目的蛋白是完全可溶的，因为你的目的蛋白在破胞离心后，和上清液一块带走了（有些膜蛋白除外） 回答你的问题真是累累哦 |
4楼2009-11-29 01:37:00
