| 查看: 1202 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
如何判断外源蛋白形成包涵体
|
|||
|
如何判断挂在表达载体上的外源片段被诱导表达后是否形成包涵体？ 我需要的是可溶性的目的蛋白； 菌体超声破碎后没有澄清，有人建议破碎离心后，上清和沉淀分别跑蛋白胶，但具体步骤如何进行，恳请大家指点一下啊！ |
回复此楼» 猜你喜欢
276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历
已经有4人回复
-
284求调剂
已经有6人回复
-
306求调剂
已经有7人回复
-
291求调剂
已经有5人回复
-
070300化学求调剂
已经有4人回复
-
070300，一志愿北航320求调剂
已经有5人回复
-
085600材料与化工
已经有9人回复
-
0703 调剂
已经有6人回复
-
招08考数学
已经有11人回复
-
276求调剂
已经有4人回复
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44460.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4692
- 在线: 781.4小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
2楼2009-11-28 01:00:46
3楼2009-11-29 00:34:19
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44460.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4692
- 在线: 781.4小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-29 08:54
tutufei(金币+10,VIP+0):辛苦了，多谢 12-8 14:33
amisking(金币+2,VIP+0): 11-29 08:54
tutufei(金币+10,VIP+0):辛苦了，多谢 12-8 14:33
|
1.破碎后上清液加上样缓冲液当然需要沸水煮的，是变性胶呀！要区别清楚变性和非变性胶哦 2.如果沉淀直接加上样缓冲液，沸水煮后会有变性的目的蛋白释放出来，离心后用上清跑变性胶，这样效果不好的，因为上样缓冲液不一定能把包涵体（如果是的话）溶解完全。 3.尿素就是使包涵体变性了嘛，这要搞清楚，蛋白变成单肽了。 4.一般情况下我们判断外源蛋白是否形成包涵体，在完全破胞后离心取上清跑变性胶，如果有目的蛋白出现，至少说明有可溶成分的； 5.细胞残渣再用8M尿素处理后离心取上清跑变性胶，没有出现目的蛋白的话，再一次说明你的目的蛋白是完全可溶的，因为你的目的蛋白在破胞离心后，和上清液一块带走了（有些膜蛋白除外） 回答你的问题真是累累哦 |
4楼2009-11-29 01:37:00
qingfengwu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: -5.8
- 帖子: 280
- 在线: 22.1小时
- 虫号: 283101
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
5楼2009-11-29 12:40:33
6楼2009-11-29 12:52:01
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44460.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4692
- 在线: 781.4小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
7楼2009-11-29 14:48:00
