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mandy992

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆测序出现了问题

rt。用peasy-t1克隆后,m13通用引物出现了空载,但是用我自己的特异引物却出现了目的条带。于是送去测序,结果跟我预想的序列存在差异。不解:空载怎么会出来目的条带,如果不是单克隆的话,峰图应该会差啊,峰图很好的。谢谢了
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mandy992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-27 09:34:
m13通用引物出现了空载,是什么意思啊?

就是用m13做菌液pcr,出现了200bp左右的条带,应该是空载体(产物没有连接)
4楼2009-11-27 11:16:59
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gyesang

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
m13通用引物出现了空载,是什么意思啊?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-11-27 09:34:55
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changes

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mandy992 at 2009-11-27 09:17:
rt。用peasy-t1克隆后,m13通用引物出现了空载,但是用我自己的特异引物却出现了目的条带。于是送去测序,结果跟我预想的序列存在差异。不解:空载怎么会出来目的条带,如果不是单克隆的话,峰图应该会差啊,峰图 ...

看来楼主是跟pEASY-T1载体干上了,为什么非得用它呢,T3载体做TA克隆也挺好用啊。你碰到的问题还是问公司的技术支持吧,他们更懂这些。
3楼2009-11-27 09:40:18
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mandy992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by changes at 2009-11-27 09:40:

看来楼主是跟pEASY-T1载体干上了,为什么非得用它呢,T3载体做TA克隆也挺好用啊。你碰到的问题还是问公司的技术支持吧,他们更懂这些。

一直用的t1,只有个别时候会出问题。90%以上还是挺好用的。还一直怀疑是不是m13引物出了问题。发现这个coi片段太恶心了
5楼2009-11-27 11:27:23
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