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mandy992

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆测序出现了问题

rt。用peasy-t1克隆后，m13通用引物出现了空载，但是用我自己的特异引物却出现了目的条带。于是送去测序，结果跟我预想的序列存在差异。不解：空载怎么会出来目的条带，如果不是单克隆的话，峰图应该会差啊，峰图很好的。谢谢了
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1楼 2009-11-27 09:17:04
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
m13通用引物出现了空载，是什么意思啊？
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2楼2009-11-27 09:34:55
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changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mandy992 at 2009-11-27 09:17:
rt。用peasy-t1克隆后，m13通用引物出现了空载，但是用我自己的特异引物却出现了目的条带。于是送去测序，结果跟我预想的序列存在差异。不解：空载怎么会出来目的条带，如果不是单克隆的话，峰图应该会差啊，峰图 ...

看来楼主是跟pEASY-T1载体干上了，为什么非得用它呢，T3载体做TA克隆也挺好用啊。你碰到的问题还是问公司的技术支持吧，他们更懂这些。
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3楼2009-11-27 09:40:18
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mandy992

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-27 09:34:
m13通用引物出现了空载，是什么意思啊？

就是用m13做菌液pcr，出现了200bp左右的条带，应该是空载体（产物没有连接）
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4楼2009-11-27 11:16:59
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mandy992

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by changes at 2009-11-27 09:40:

看来楼主是跟pEASY-T1载体干上了，为什么非得用它呢，T3载体做TA克隆也挺好用啊。你碰到的问题还是问公司的技术支持吧，他们更懂这些。

一直用的t1，只有个别时候会出问题。90%以上还是挺好用的。还一直怀疑是不是m13引物出了问题。发现这个coi片段太恶心了
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5楼2009-11-27 11:27:23
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