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刘仕博金虫 (著名写手)
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[交流]
说说我试验的时候遇到的那些破事，还请real time-PCR的高手多指教！
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从不知道引物是什么到现在实验做的挺顺手一共也就一个月的时间。但咱不是实验员，光实验做的顺手也不是那么回事情。先和大家磨叨下吧~ 因为现在实验室里面都是一群死脑筋的韩国人，所以从他们那学到的东西也就很死板。找real time用的引物就一定要用real time专用的软件，退火温度一定要是60度。。。。。。搞的我一天的为引物测试而发愁，一旦发现引物不对或者扩增效率不够好就只想着换引物。后来我做了一次一般的PCR发现有的引物虽然有二级结构，但还是能用的，而且结果还不错。所以我就想着可能改下温度或者引物的量的话好像也是可以做出来的。 今天我就第一次换了个温度做了一次引物测试，结果有几个以前扩增效率不好的引物也变的可以用了，但有几个还是很不理想。最要命的是我的内参在60度的时候可以用，58度的时候扩增效率就不好了。我就又增加了引物的量，希望这次能成功。如果这次还不成功的话我就真的不知道还有什么办法了。 还请高手们多多指点下。。。 先谢啦~ |
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