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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助】RNA有那么难提取吗?苦恼

我想请问一下,RNA的提取有那么难提取么?有经验的各路大侠给点意见,我提取了很多次了都是降解的或者是没有条带的,是怎么回事呢?DEPC水配制是1000mlddH2O+1ml的DEPC(原溶液)。操作都是戴口罩和手套,液氮研磨和4°C离心,沉淀用-20°C来进行沉淀,抢头和离心管都是DEPC水浸泡过夜的,我想到底真的有那么难提取么??气死我了!
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竹子9722

木虫 (正式写手)


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我虽然不知道怎么回事,但是有过类似的经历吧。换个方法提取可能会成功的哦
2楼2009-11-25 14:44:30
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ljwei_163

金虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 11-25 19:43
-20度沉淀?你用的什么方法?
用TRIZOL就很好的,按说明书步骤就行了
电泳槽,移液器最好是RNA专用的
3楼2009-11-25 14:44:44
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0): 11-25 19:43
当然要-20度沉淀了,用TRIZOL也要这步的,楼主提的植物的吧,其实很简单啊,当年我提的一次性成功的,是不是你做胶的问题,建议用MOPS甲醛变形浇检测,效果会非常好。我不知道怎么发图的,我这里有我上学时候跑得RNA胶,·电泳槽应该用专用的,还有枪,电泳槽可以用氢氧化钠溶液浸泡,希望对你有帮助
4楼2009-11-25 15:13:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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请问楼主提的是什么组织?
5楼2009-11-25 15:37:32
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pecky945

木虫 (正式写手)

建议换一套提取的试剂系统

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 11-28 10:39
如果Trizol没有问题的话,建议换一套提取的试剂系统(氯仿、异丙醇、无水乙醇等)!
宁静以致远!
6楼2009-11-25 15:53:35
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生命核心

木虫 (正式写手)


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移液器最好是RNA专用的,很关键
7楼2009-11-25 18:36:24
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刘仕博

金虫 (著名写手)

★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 11-25 21:03
估计是方法不行吧。
我之前提取RNA的时候也是总也提不出来,那个时候还是用的试剂盒的,挺贵的。后来换了个方法,现在我提取RNA的时候口罩都不用,它也能出来。建议换个方法看看。
再就是做实验的时候一定要仔细,那个东西很容易就降解了
生命在于折腾~
8楼2009-11-25 19:07:14
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

特别注意一点,一定要买好的酚,sigma最好,500多250ml,去蛋白效果非常好,酶去掉了,降解就少了。
但愿人长久
9楼2009-11-26 08:05:00
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lzhwin

木虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0): 11-28 10:39
楼主说一下是什么植物,不同的植物差别很大。水稻拟南芥怎么提怎么有。你要是提了些什么瓜果蔬菜之类的有些就会很麻烦,常用的trizol或者试剂盒未必奏效。可能需要楼主尝试不同的方法。文献里也有很多方法,建议楼主还是多查文献吧,否则只能使在重复错误
10楼2009-11-27 11:39:05
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