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ATGTTCAAGGGGCTGAGCAAAGGCTCCCAGGGGAAGGGGTCCCCCAAGGGCTCCCCCGCCAAGGGGTCCCCCAAAGGCTCCCCCAGCAGGCACAGCCGGGCTGCCACCCAGGAGCTGGCCCTTCTCATCTCCCGCATGCAAGCCAACGCCGACCAGGTGGAGCGGGACATCCTGGAGACGCAGAAGAGGCTGCAGCAGGACCGGCTGAACAGTGAGCAGAGCCAGGCCCTGCAGCACCAGCAGGAGACGGGCCGCAGCCTGAAGGAGGCTGAGGTGCTGCTCAAGGACCTCTTCCTGGACGTGGACAAGGCCCGGCGGCTCAAGCACCCGCAGGCTGAGGAGATTGAGAAGGACATCAAGCAGCTGCACGAGCGGGTGACCCAGGAGTGTGCGGAGTACCGTGCCCTGTACGAGAAGATGGTGCTGCCCCCCGACGTGGGACCCAGGGTCGACTGGGCACGCGTGCTGGAGCAGAAACAGAAGCAGGTCTGCGCAGGCCAGTACGGGCCGGGCATGGCGGAGCTGGAGCAACAGATCGCCGAGCACAACATCCTGCAGAAGGAGATCGACGCCTATGGGCAGCAGCTGCGGAGCCTCGTGGGGCCGGATGCAGCCACCATCCGGAGCCAATACCGAGACCTACTGAAGGCGGCGTCGTGGCGCGGGCAGAGCCTGGGCAGCCTGTACACGCACCTCCAGGGCTGCACGCGGCAGCTGAGCGCCCTGGCTGAGCAGCAGCGCCGCATCCTGCAGCAGGACTGGAGCGACCTCATGGCCGACCCTGCGGGCGTGCGGCGGGAGTACGAGCACTTCAAGCAGCACGAGCTGCTGAGCCAGGAGCAGAGCGTGAACCAGCTGGAGGACGACGGCGAGCGCATGGTGGAGCTGCGGCACCCCGCGGTGGGGCCCATCCAGGCCCACCAGGAGGCCCTGAAGATGGAGTGGCAGAACTTCCTGAACCTGTGTATCTGCCAGGAGACCCAGCTGCAGCACGTGGAGGACTACCGCCGGTTCCAGGAAGAGGCCGACTCAGTCAGCCAGACCCTGGCGAAGCTCAACTCCAACTTGGATGCCAAGTACAGCCCTGCACCTGGGGGCCCCCCTGGCGCCCCCACAGAGCTGCTGCAACAGCTGGAGGCAGAGGAAAAACGGCTGGCCGTCACCGAGAGGGCCACTGGGGACCTGCAGCGGCGAAGCCGGGATGTGGCCCCTCTGCCACAGCGAAGAAACCCCCCTCAGCAGCCCCTGCACGTGGACAGCATCTGCGACTGGGACTCAGGAGAAGTGCAGCTGCTGCAGGGTGAGCGGTATAAGCTGGTAGATAACACTGACCCGCACGCCTGGGTCGTGCAGGGCCCTGGCGGGGAGACCAAGCGTGCTCCCGCCGCCTGCTTCTGCATCCCAGCACCAGACCCTGATGCTGTGGCCAGGGCCTCCCGGCTGGCCTCAGAGCTGCAGGCCCTGAAGCAGAAATTGGCCACAGTCCAGAGCCGCCTGAAGGCCAGTGCTGTGGAGTCTCTTCGGCCCAGCCAGCAGGCTCCATCTGGCTCAGACCTGGCCAACCCACAGGCCCAGAAGCTCCTGACACAGATGACCCGGCTGGATGGAGACCTGGGACAGATAGAGAGGCAGGTGCTGGCCTGGGCGCGGGCCCCGCTGAGCCGCCCCACACCCTTGGAGGACTTGGAGGGCCGCATCCACAGCCATGAGGGCACAGCCCAGCGCCTGCAGAGCCTGGGAACGGAGAAGGAGACAGCCCAGAAGGAGTGCGAGGCGTTTCTGTCCACGCGGCCCGTGGGCCCCGCTGCCCTGCAGCTGCCCGTAGCCCTCAACAGCGTGAAGAACAAGTTCAGTGACGTGCAGGTTCTGTGCAGCCTCTACGGGGAGAAAGCCAAGGCTGCCCTGGATCTGGAGCGGCAGATCCAGGATGCGGACAGGGTCATCCGAGGCTTCGAGGCCACCCTGGTGCAGGAGGCCCCCATCCCTGCTGAACCGGGGGCTCTGCAGGAGAGGGTCAGCGAGCTGCAGCGCCAGCGGAGGGAGCTGCTGGAACAGCAGACCTGCGTGCTGCGGCTACACCGCGCGCTGAAGGCCTCGGAGCACGCATGCGCTGCCCTGCAGAACAACTTCCAGGAGTTCTGCCAAGACCTGCCTCGCCAGCAGCGCCAGGTGCGAGCCCTCACCGACCGCTACCACGCCGTAGGGGACCAGCTGGACCTGCGGGAGAAGGTGGTGCAGGATGCCGCCCTCACCTACCAGCAGTTCAAGAACTGCAAGGATAACCTGAGCTCCTGGCTGGAGCACCTGCCCCGCAGCCAGGTGCGGCCCAGCGACGGCCCCAGCCAGATCGCCTACAAGCTGCAGGCGCAGAAGAGGCTGACGCAGGAGATCCAGAGCCGAGAGCGGGACAGGGCCACAGCATCCCACCTCTCCCAGGCCCTGCAGGCAGCGCTCCAGGACTATGAGCTCCAGGCAGACACCTACCGCTGCTCTTTGGAGCCCACCCTGGCAGTGTCAGCCCCCAAGAGACCCCGAGTGGCTCCCCTGCAAGAGAGCATCCAAGCCCAGGAGAAGAACCTTGCAAAGGCCTATACTGAGGTTGCAGCAGCACAGCAGCAGCTGCTCCAGCAGCTGGAGTTTGCTAGAAAAATGCTGGAGAAGAAGGAGCTCAGTGAGGACATCCGAAGGACCCATGATGCAAAGCAGGGCTCCGAGAGCCCTGCCCAAGCAGGGAGAGAGTCAGAGGCCCTGAAGGCCCAGCTGGAAGAGGAGAGGAAGCGGGTGGCCCGGGTGCAGCATGAGCTGGAGGCGCAGAGGAGCCAACTGCTGCAGCTGAGGACCCAGCGGCCCTTGGAGAGGCTGGAGGAGAAGGAAGTGGTAGAGTTCTACCGGGACCCCCAGCTGGAGGGCAGCCTGTCCAGGGTGAAGGCCCAGGTGGAGGAGGAGGGCAAGCGGCGGGCTGGCCTGCAGGCAGACCTGGAAGTGGCAGCCCAGAAGGTCGTGCAGCTGGAAAGCAAGAGGAAGACCATGCAGCCTCATCTGCTGACCAAGGAGGTCACCCAGGTGGAGAGGGACCCCGGCCTGGACAGCCAGGCGGCCCAGCTCAGGATCCAGATCCAGCAGCTCCGCGGGGAGGATGCCGTCATCTCGGCCCGGCTGGAAGGGCTGAAGAAGGAGCTACTGGCCCTTGAGAAGAGGGAGGTGGACGTGAAGGAGAAGGTCGTGGTGAAAGAGGTAGTCAAGGTGGAGAAGAATCTGGAAATGGTCAAGGCAGCCCAGGCTCTGAGGCTGCAGATGGAGGAGGATGCTGCGCGGAGGAAGCAGGCGGAGGAGGCTGTGGCCAAGCTACAGGCTCGCATCGAAGACCTGGAGCGGGCTATCAGCTCGGTGGAGCCCAAGGTCATCGTGAAGGAGGTGAAGAAGGTGGAGCAGGACCCAGGGCTCCTCCAGGAGTCCTCCAGGCTGAGGAGCCTCCTCGAGGAGGAGAGGACCAAGAACGCGACGCTGGCCAGGGAGCTGAGCGACCTGCACAGCAAGTACAGCGTGGTGGAGAAGCAGAGGCCCAAAGTGCAGCTCCAGGAGCGCGTCCACGAGATCTTCCAGGTGGATCCGGAGACAGAGCAGGAGATCACTCGGCTCAAGGCCAAGCTGCAGGAGATGGCGGGCAAGAGGAGCGGTGTGGAGAAGGAGGTGGAGAAGCTGCTGCCCGACCTGGAGGTCCTGCGGGCCCAGAAGCCCACGGTGGAGTACAAGGAGGTGACCCAGGAGGTGGTGAGGCATGAGAGGAGCCCCGAGGTGCTGCGTGAGATCGACCGCCTGAAGGCTCAGCTCAACGAGCTCGTCAACAGCCACGGGCGCTCCCAGGAGCAGCTCATCCGCCTGCAGGGTGAGCGCGACGAGTGGAGGCGCGAGCGGGCCAAGGTGGAGACCAAGACGGTGAGCAAGGAGGTGGTGCGCCACGAGAAGGACCCGGTGCTGGAGAAAGAAGCAGAGCGGCTCCGCCAGGAGGTGCGGGAGGCGGCCCAGAAGAGGCGGGCCGCGGAGGACGCGGTGTACGAGCTGCAGAGCAAGCGCCTGCTGCTGGAGAGGAGGAAGCCCGAGGAGAAGGTGGTGGTGCAGGAGGTGGTGGTCACCCAGAAGGACCCGAAGCTGCGCGAGGAGCACAGCCGGCTGAGCGGGAGCCTGGATGAGGAGGTGGGCCGGCGGCGCCAGCTAGAGCTTGAGGTGCAGCAGCTGCGGGCCGGCGTGGAGGAGCAGGAGGGCCTGCTCAGCTTCCAGGAGGACCGCAGCAAGAAGCTGGCCGTGGAGAGGGAGCTGCGGCAGCTGACCTTGAGGATCCAGGAGCTCGAGAAGCGGCCTCCCACGGTGCAGGAGAAGATCATCATGGAGGAAGTGGTCAAGCTGGAGAAGGACCCGGACCTGGAGAAGTCCACGGAAGCCCTGCGGTGGGACCTGGACCAGGAGAAGACCCAGGTAACCGAGCTGAATCGGGAGTGCAAGAACCTGCAGGTCCAGATTGACGTCCTCCAGAAAGCCAAATCGCAGGAGAAGACCATCTACAAGGAAGTGATCCGGGTGCAGAAGGACCGCGTCCTGGAAGATGAGCGGGCCCGCGTGTGGGAGATGCTCAACAGGGAGCGCACGGCCCGGCAGGCCCGGGAGGAGGAGGCACGGCGCCTGCGGGAGCGCATTGACCGGGCCGAGACGCTGGGGAGAACCTGGTCCCGGGAGGAGTCCGAGCTGCAGAGGGCCCGGGACCAGGCCGACCAGGAGTGTGGGCGGCTGCAGCAGGAGCTGCGGGCTCTGGAGAGGCAGAAGCAGCAGCAGACACTGCAGCTGCAGGAGGAGTCGAAGCTGCTCAGCCAGAAGACGGAGAGCGAGCGACAGAAGGCGGCCCAGCGGGGCCAGGAGCTCTCGCGGCTGGAGGCGGCCATCCTCCGCGAGAAGGACCAGATCTACGAGAAGGAGCGGACGCTCCGGGACCTCCACGCCAAGGTGAGCCGGGAGGAGCTCAGCCAGGAGACCCAGACGCGAGAGACCAACCTTTCCACCAAGATCTCCATCCTGGAACCCGAGACGGGGAAGGACATGTCCCCATACGAGGCCTACAAGAGGGGCATCATCGACAGGGGCCAGTACTTGCAGCTGCAGGAGCTCGAGTGTGACTGGGAGGAGGTCACCACCTCGGGGCCCTGTGGGGAGGAGTCTGTGCTCCTGGACCGCAAGAGCGGGAAGCAGTACTCCATCGAGGCCGCCCTCCGCTGCCGGCGCATCTCTAAGGAGGAGTACCATCTGTACAAGGACGGCCACCTGCCCATCTCCGAGTTTGCGCTGCTTGTAGCTGGGGAGACCAAGCCAAGCTCCTCACTCTCCATCGGCTCTATCATCTCCAAGTCCCCGCTCGCCTCCCCGGCCCCCCAGAGCACCAGTTTCTTCTCTCCCAGCTTCTCTCTCGGGCTCGGTGATGACAGCTTCCCTATCGCCGGGATCTATGACACAACCACAGACAACAAGTGCAGCATCAAGACGGCCGTGGCCAAGAACATGCTGGACCCCATCACTGGGCAGAAGCTACTGGAGGCCCAGGCGGCCACAGGGGGCATCGTGGACCTGCTCAGCCGTGAGCGCTACTCTGTGCACAAGGCGATGGAGAGGGGCCTGATCGAGAACACCTCCACACAGAGGCTGCTTAACGCCCAGAAGGCCTTCACCGGCATCGAGGACCCCGTCACCAAGAAGAGGCTCTCGGTGGGCGAGGCCGTCCAGAAGGGCTGGATGCCCCGGGAGAGCGTGCTCCCACACCTGCAGGTGCAGCACCTGACCGGGGGGCTCATCGACCCCAAGAGGACAGGCCGCATCCCCATCCAGCAGGCCCTCCTCTCCGGGATGATCAGTGAAGAGCTGGCCCAGCTCCTGCAGGACGAGTCCAGCTACGAGAAGGATTTGACAGACCCCATCTCCAAGGAACGGCTGAGCTACAAGGAGGCCATGGGCCGCTGCCGCAAAGACCCCCTGAGCGGCCTGCTGCTCCTGCCAGCGGCACTGGAGGGGTACCGCTGCTACCGCTCCGCCTCCCCCACCGTCCCGCGCTCCCTTCGCTGA 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1949stone(金币+5,VIP+0):够热情 11-25 10:01
fengwenbin(金币+5,VIP+0):谢谢，我是做rt-p，struggle很久了，循环中30度要6‘30？望详细指导谢谢 11-25 22:52
1949stone(金币+5,VIP+0):够热情 11-25 10:01
fengwenbin(金币+5,VIP+0):谢谢，我是做rt-p，struggle很久了，循环中30度要6‘30？望详细指导谢谢 11-25 22:52
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你的这个给基因好大，引物最好长一些，以我4年经验，引物为下： 正向：5' atgttcaaggggctgagcaaaggctcccagg 3' 反向：5' tcagcgaagggagcgcgggacggtggg 3' 建议用LA TAQ 酶做PCR，条件： 94度 5分钟 94度 30秒 72度 6分钟30秒 25个循环 72度 10分钟 如果你是做TR-PCR，做最分做两步 如果以上条件不行，也设计4条引物，先PCR得到两条片段，在OVER LAPPING PCR |
6楼2009-11-25 09:50:19
charlies929
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 16308.8
- 散金: 50
- 红花: 11
- 帖子: 940
- 在线: 149.2小时
- 虫号: 465261
- 注册: 2007-11-22
- 性别: GG
- 专业: 环境化学
2楼2009-11-25 09:26:04
bbyu007
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2018.2
- 散金: 99
- 红花: 1
- 帖子: 348
- 在线: 20.8小时
- 虫号: 482918
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
我给你总结了一下几个比较好的引物，你可以任意组合扩增，请参考：
★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+5,VIP+0):好手段 11-25 09:51
1949stone(金币+5,VIP+0):好手段 11-25 09:51
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正向链： （1）5‘-3’ ：AGAACTTCCTGAACCTGTGTATCT 得分93，位点947，长度24bp，Tm 56.2，GC% 41.7% （2）5‘-3’ ：GGTCGTGGTGAAAGAGGTAGTCAA 得分92，位点3219，长度24bp，Tm 63.2，GC% 50% （3）5‘-3’ ：GATCTATGACACAACCACAGACAA 得分92，位点5487，长度24bp，Tm 56.8，GC% 41.7% 反向链： （1）5‘-3’ ：CTTGTTGTCTGTGGTTGTGTCATA 得分100，位点5514，长度24bp，Tm 57.9，GC% 41.7% （2）5‘-3’ ：TGTTGTCTGTGGTTGTGTCATAGA 得分92，位点5512，长度24bp，Tm 58.1，GC% 41.7% （3）5‘-3’ ：GTCTGTGGTTGTGTCATAGATCCC 得分90，位点5508，长度24bp，Tm 60，GC% 50% |
3楼2009-11-25 09:37:42
5楼2009-11-25 09:42:16
