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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮忙设计引物 产物100-500，超过九十分的60币
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fengwenbin

铜虫 (初入文坛)

[交流] 帮忙设计引物 产物100-500，超过九十分的60币

ATGTTCAAGGGGCTGAGCAAAGGCTCCCAGGGGAAGGGGTCCCCCAAGGGCTCCCCCGCCAAGGGGTCCCCCAAAGGCTCCCCCAGCAGGCACAGCCGGGCTGCCACCCAGGAGCTGGCCCTTCTCATCTCCCGCATGCAAGCCAACGCCGACCAGGTGGAGCGGGACATCCTGGAGACGCAGAAGAGGCTGCAGCAGGACCGGCTGAACAGTGAGCAGAGCCAGGCCCTGCAGCACCAGCAGGAGACGGGCCGCAGCCTGAAGGAGGCTGAGGTGCTGCTCAAGGACCTCTTCCTGGACGTGGACAAGGCCCGGCGGCTCAAGCACCCGCAGGCTGAGGAGATTGAGAAGGACATCAAGCAGCTGCACGAGCGGGTGACCCAGGAGTGTGCGGAGTACCGTGCCCTGTACGAGAAGATGGTGCTGCCCCCCGACGTGGGACCCAGGGTCGACTGGGCACGCGTGCTGGAGCAGAAACAGAAGCAGGTCTGCGCAGGCCAGTACGGGCCGGGCATGGCGGAGCTGGAGCAACAGATCGCCGAGCACAACATCCTGCAGAAGGAGATCGACGCCTATGGGCAGCAGCTGCGGAGCCTCGTGGGGCCGGATGCAGCCACCATCCGGAGCCAATACCGAGACCTACTGAAGGCGGCGTCGTGGCGCGGGCAGAGCCTGGGCAGCCTGTACACGCACCTCCAGGGCTGCACGCGGCAGCTGAGCGCCCTGGCTGAGCAGCAGCGCCGCATCCTGCAGCAGGACTGGAGCGACCTCATGGCCGACCCTGCGGGCGTGCGGCGGGAGTACGAGCACTTCAAGCAGCACGAGCTGCTGAGCCAGGAGCAGAGCGTGAACCAGCTGGAGGACGACGGCGAGCGCATGGTGGAGCTGCGGCACCCCGCGGTGGGGCCCATCCAGGCCCACCAGGAGGCCCTGAAGATGGAGTGGCAGAACTTCCTGAACCTGTGTATCTGCCAGGAGACCCAGCTGCAGCACGTGGAGGACTACCGCCGGTTCCAGGAAGAGGCCGACTCAGTCAGCCAGACCCTGGCGAAGCTCAACTCCAACTTGGATGCCAAGTACAGCCCTGCACCTGGGGGCCCCCCTGGCGCCCCCACAGAGCTGCTGCAACAGCTGGAGGCAGAGGAAAAACGGCTGGCCGTCACCGAGAGGGCCACTGGGGACCTGCAGCGGCGAAGCCGGGATGTGGCCCCTCTGCCACAGCGAAGAAACCCCCCTCAGCAGCCCCTGCACGTGGACAGCATCTGCGACTGGGACTCAGGAGAAGTGCAGCTGCTGCAGGGTGAGCGGTATAAGCTGGTAGATAACACTGACCCGCACGCCTGGGTCGTGCAGGGCCCTGGCGGGGAGACCAAGCGTGCTCCCGCCGCCTGCTTCTGCATCCCAGCACCAGACCCTGATGCTGTGGCCAGGGCCTCCCGGCTGGCCTCAGAGCTGCAGGCCCTGAAGCAGAAATTGGCCACAGTCCAGAGCCGCCTGAAGGCCAGTGCTGTGGAGTCTCTTCGGCCCAGCCAGCAGGCTCCATCTGGCTCAGACCTGGCCAACCCACAGGCCCAGAAGCTCCTGACACAGATGACCCGGCTGGATGGAGACCTGGGACAGATAGAGAGGCAGGTGCTGGCCTGGGCGCGGGCCCCGCTGAGCCGCCCCACACCCTTGGAGGACTTGGAGGGCCGCATCCACAGCCATGAGGGCACAGCCCAGCGCCTGCAGAGCCTGGGAACGGAGAAGGAGACAGCCCAGAAGGAGTGCGAGGCGTTTCTGTCCACGCGGCCCGTGGGCCCCGCTGCCCTGCAGCTGCCCGTAGCCCTCAACAGCGTGAAGAACAAGTTCAGTGACGTGCAGGTTCTGTGCAGCCTCTACGGGGAGAAAGCCAAGGCTGCCCTGGATCTGGAGCGGCAGATCCAGGATGCGGACAGGGTCATCCGAGGCTTCGAGGCCACCCTGGTGCAGGAGGCCCCCATCCCTGCTGAACCGGGGGCTCTGCAGGAGAGGGTCAGCGAGCTGCAGCGCCAGCGGAGGGAGCTGCTGGAACAGCAGACCTGCGTGCTGCGGCTACACCGCGCGCTGAAGGCCTCGGAGCACGCATGCGCTGCCCTGCAGAACAACTTCCAGGAGTTCTGCCAAGACCTGCCTCGCCAGCAGCGCCAGGTGCGAGCCCTCACCGACCGCTACCACGCCGTAGGGGACCAGCTGGACCTGCGGGAGAAGGTGGTGCAGGATGCCGCCCTCACCTACCAGCAGTTCAAGAACTGCAAGGATAACCTGAGCTCCTGGCTGGAGCACCTGCCCCGCAGCCAGGTGCGGCCCAGCGACGGCCCCAGCCAGATCGCCTACAAGCTGCAGGCGCAGAAGAGGCTGACGCAGGAGATCCAGAGCCGAGAGCGGGACAGGGCCACAGCATCCCACCTCTCCCAGGCCCTGCAGGCAGCGCTCCAGGACTATGAGCTCCAGGCAGACACCTACCGCTGCTCTTTGGAGCCCACCCTGGCAGTGTCAGCCCCCAAGAGACCCCGAGTGGCTCCCCTGCAAGAGAGCATCCAAGCCCAGGAGAAGAACCTTGCAAAGGCCTATACTGAGGTTGCAGCAGCACAGCAGCAGCTGCTCCAGCAGCTGGAGTTTGCTAGAAAAATGCTGGAGAAGAAGGAGCTCAGTGAGGACATCCGAAGGACCCATGATGCAAAGCAGGGCTCCGAGAGCCCTGCCCAAGCAGGGAGAGAGTCAGAGGCCCTGAAGGCCCAGCTGGAAGAGGAGAGGAAGCGGGTGGCCCGGGTGCAGCATGAGCTGGAGGCGCAGAGGAGCCAACTGCTGCAGCTGAGGACCCAGCGGCCCTTGGAGAGGCTGGAGGAGAAGGAAGTGGTAGAGTTCTACCGGGACCCCCAGCTGGAGGGCAGCCTGTCCAGGGTGAAGGCCCAGGTGGAGGAGGAGGGCAAGCGGCGGGCTGGCCTGCAGGCAGACCTGGAAGTGGCAGCCCAGAAGGTCGTGCAGCTGGAAAGCAAGAGGAAGACCATGCAGCCTCATCTGCTGACCAAGGAGGTCACCCAGGTGGAGAGGGACCCCGGCCTGGACAGCCAGGCGGCCCAGCTCAGGATCCAGATCCAGCAGCTCCGCGGGGAGGATGCCGTCATCTCGGCCCGGCTGGAAGGGCTGAAGAAGGAGCTACTGGCCCTTGAGAAGAGGGAGGTGGACGTGAAGGAGAAGGTCGTGGTGAAAGAGGTAGTCAAGGTGGAGAAGAATCTGGAAATGGTCAAGGCAGCCCAGGCTCTGAGGCTGCAGATGGAGGAGGATGCTGCGCGGAGGAAGCAGGCGGAGGAGGCTGTGGCCAAGCTACAGGCTCGCATCGAAGACCTGGAGCGGGCTATCAGCTCGGTGGAGCCCAAGGTCATCGTGAAGGAGGTGAAGAAGGTGGAGCAGGACCCAGGGCTCCTCCAGGAGTCCTCCAGGCTGAGGAGCCTCCTCGAGGAGGAGAGGACCAAGAACGCGACGCTGGCCAGGGAGCTGAGCGACCTGCACAGCAAGTACAGCGTGGTGGAGAAGCAGAGGCCCAAAGTGCAGCTCCAGGAGCGCGTCCACGAGATCTTCCAGGTGGATCCGGAGACAGAGCAGGAGATCACTCGGCTCAAGGCCAAGCTGCAGGAGATGGCGGGCAAGAGGAGCGGTGTGGAGAAGGAGGTGGAGAAGCTGCTGCCCGACCTGGAGGTCCTGCGGGCCCAGAAGCCCACGGTGGAGTACAAGGAGGTGACCCAGGAGGTGGTGAGGCATGAGAGGAGCCCCGAGGTGCTGCGTGAGATCGACCGCCTGAAGGCTCAGCTCAACGAGCTCGTCAACAGCCACGGGCGCTCCCAGGAGCAGCTCATCCGCCTGCAGGGTGAGCGCGACGAGTGGAGGCGCGAGCGGGCCAAGGTGGAGACCAAGACGGTGAGCAAGGAGGTGGTGCGCCACGAGAAGGACCCGGTGCTGGAGAAAGAAGCAGAGCGGCTCCGCCAGGAGGTGCGGGAGGCGGCCCAGAAGAGGCGGGCCGCGGAGGACGCGGTGTACGAGCTGCAGAGCAAGCGCCTGCTGCTGGAGAGGAGGAAGCCCGAGGAGAAGGTGGTGGTGCAGGAGGTGGTGGTCACCCAGAAGGACCCGAAGCTGCGCGAGGAGCACAGCCGGCTGAGCGGGAGCCTGGATGAGGAGGTGGGCCGGCGGCGCCAGCTAGAGCTTGAGGTGCAGCAGCTGCGGGCCGGCGTGGAGGAGCAGGAGGGCCTGCTCAGCTTCCAGGAGGACCGCAGCAAGAAGCTGGCCGTGGAGAGGGAGCTGCGGCAGCTGACCTTGAGGATCCAGGAGCTCGAGAAGCGGCCTCCCACGGTGCAGGAGAAGATCATCATGGAGGAAGTGGTCAAGCTGGAGAAGGACCCGGACCTGGAGAAGTCCACGGAAGCCCTGCGGTGGGACCTGGACCAGGAGAAGACCCAGGTAACCGAGCTGAATCGGGAGTGCAAGAACCTGCAGGTCCAGATTGACGTCCTCCAGAAAGCCAAATCGCAGGAGAAGACCATCTACAAGGAAGTGATCCGGGTGCAGAAGGACCGCGTCCTGGAAGATGAGCGGGCCCGCGTGTGGGAGATGCTCAACAGGGAGCGCACGGCCCGGCAGGCCCGGGAGGAGGAGGCACGGCGCCTGCGGGAGCGCATTGACCGGGCCGAGACGCTGGGGAGAACCTGGTCCCGGGAGGAGTCCGAGCTGCAGAGGGCCCGGGACCAGGCCGACCAGGAGTGTGGGCGGCTGCAGCAGGAGCTGCGGGCTCTGGAGAGGCAGAAGCAGCAGCAGACACTGCAGCTGCAGGAGGAGTCGAAGCTGCTCAGCCAGAAGACGGAGAGCGAGCGACAGAAGGCGGCCCAGCGGGGCCAGGAGCTCTCGCGGCTGGAGGCGGCCATCCTCCGCGAGAAGGACCAGATCTACGAGAAGGAGCGGACGCTCCGGGACCTCCACGCCAAGGTGAGCCGGGAGGAGCTCAGCCAGGAGACCCAGACGCGAGAGACCAACCTTTCCACCAAGATCTCCATCCTGGAACCCGAGACGGGGAAGGACATGTCCCCATACGAGGCCTACAAGAGGGGCATCATCGACAGGGGCCAGTACTTGCAGCTGCAGGAGCTCGAGTGTGACTGGGAGGAGGTCACCACCTCGGGGCCCTGTGGGGAGGAGTCTGTGCTCCTGGACCGCAAGAGCGGGAAGCAGTACTCCATCGAGGCCGCCCTCCGCTGCCGGCGCATCTCTAAGGAGGAGTACCATCTGTACAAGGACGGCCACCTGCCCATCTCCGAGTTTGCGCTGCTTGTAGCTGGGGAGACCAAGCCAAGCTCCTCACTCTCCATCGGCTCTATCATCTCCAAGTCCCCGCTCGCCTCCCCGGCCCCCCAGAGCACCAGTTTCTTCTCTCCCAGCTTCTCTCTCGGGCTCGGTGATGACAGCTTCCCTATCGCCGGGATCTATGACACAACCACAGACAACAAGTGCAGCATCAAGACGGCCGTGGCCAAGAACATGCTGGACCCCATCACTGGGCAGAAGCTACTGGAGGCCCAGGCGGCCACAGGGGGCATCGTGGACCTGCTCAGCCGTGAGCGCTACTCTGTGCACAAGGCGATGGAGAGGGGCCTGATCGAGAACACCTCCACACAGAGGCTGCTTAACGCCCAGAAGGCCTTCACCGGCATCGAGGACCCCGTCACCAAGAAGAGGCTCTCGGTGGGCGAGGCCGTCCAGAAGGGCTGGATGCCCCGGGAGAGCGTGCTCCCACACCTGCAGGTGCAGCACCTGACCGGGGGGCTCATCGACCCCAAGAGGACAGGCCGCATCCCCATCCAGCAGGCCCTCCTCTCCGGGATGATCAGTGAAGAGCTGGCCCAGCTCCTGCAGGACGAGTCCAGCTACGAGAAGGATTTGACAGACCCCATCTCCAAGGAACGGCTGAGCTACAAGGAGGCCATGGGCCGCTGCCGCAAAGACCCCCTGAGCGGCCTGCTGCTCCTGCCAGCGGCACTGGAGGGGTACCGCTGCTACCGCTCCGCCTCCCCCACCGTCCCGCGCTCCCTTCGCTGA
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以人为镜！
1楼 2009-11-25 09:19:34
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
要不要前后酶切位点？
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2楼2009-11-25 09:26:04
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bbyu007

木虫 (正式写手)

我给你总结了一下几个比较好的引物，你可以任意组合扩增，请参考：

★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+5,VIP+0):好手段 11-25 09:51
正向链：
（1）5‘-3’ ：AGAACTTCCTGAACCTGTGTATCT   
得分93，位点947，长度24bp，Tm 56.2，GC% 41.7%
（2）5‘-3’ ：GGTCGTGGTGAAAGAGGTAGTCAA
得分92，位点3219，长度24bp，Tm 63.2，GC% 50%
（3）5‘-3’ ：GATCTATGACACAACCACAGACAA
得分92，位点5487，长度24bp，Tm 56.8，GC% 41.7%

反向链：
（1）5‘-3’ ：CTTGTTGTCTGTGGTTGTGTCATA
得分100，位点5514，长度24bp，Tm 57.9，GC% 41.7%
（2）5‘-3’ ：TGTTGTCTGTGGTTGTGTCATAGA
得分92，位点5512，长度24bp，Tm 58.1，GC% 41.7%
（3）5‘-3’ ：GTCTGTGGTTGTGTCATAGATCCC
得分90，位点5508，长度24bp，Tm 60，GC% 50%
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我是笨笨鱼~~~
3楼2009-11-25 09:37:42
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fengwenbin

铜虫 (初入文坛)
不用酶切位点
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以人为镜！
4楼2009-11-25 09:38:56
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fengwenbin

铜虫 (初入文坛)
反向链3'带有A,以及3CCC不行
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以人为镜！
5楼2009-11-25 09:42:16
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水过无恒

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+5,VIP+0):够热情 11-25 10:01
fengwenbin(金币+5,VIP+0):谢谢，我是做rt-p，struggle很久了，循环中30度要6‘30？望详细指导谢谢 11-25 22:52
你的这个给基因好大，引物最好长一些，以我4年经验，引物为下：

正向：5' atgttcaaggggctgagcaaaggctcccagg 3'

反向：5' tcagcgaagggagcgcgggacggtggg 3'

建议用LA TAQ 酶做PCR，条件：
94度 5分钟

94度 30秒
72度 6分钟30秒
25个循环

72度 10分钟

如果你是做TR-PCR，做最分做两步
如果以上条件不行，也设计4条引物，先PCR得到两条片段，在OVER LAPPING PCR
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6楼2009-11-25 09:50:19
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