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【交流】活体成像相关的注意事项
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看到有人在问一些 活体成像的操作，前面做了下，我大概说下，说错了大家指出来。 一般活体成像一般好像有两种，一种是体内发光的，还有一种是荧光的。体内发光的就是利用一些报告基因，表达了一些可以发光的生物分子，比如绿色荧光蛋白。这个因为不需要激发光，所以灵敏度很高。还一种是荧光的，需要激光激发，然后仪器检测发射波长的光，因为这个有背景光（激发光），灵敏度低一点。 这里体内发光的就不说了，没做过。 一般生物组织对近红外的光线吸收比较小，所以最好是用近红外的染料，波长在700到900纳米，其他的也可以，但是优先选择波长长的，比如有罗丹明和FITC，最好选择罗丹明。波长短的穿透性弱。 实验开始前，最好选择裸鼠（器官的除外），小鼠没做过，做的话要用脱毛剂，脱毛剂会损伤皮肤，也不容易搞干净，裸鼠最好。还一个非常重要的方面，就是要对照，文献上看就一个老鼠，实际在拍的时候，是两只，对照的那只被PS掉了。也就是说，最少你要比你预计的实验动物多一个。 实验的时候，有实时的，取时间点的，取器官的。做实时的时候，麻醉是一个非常重要的方面，多了就挂了，少了就醒了，醒了就乱动，照片就糊了。不过如果真的醒了（怎么也半个小时后了），也不用怕，用胶带固定四肢，后面PS掉胶带，因为我们大部分感兴趣的地方在躯干。 还有需要注意的地方，就是在进行尾静脉注射的时候，一定要注射好，如果注射到血管外面，在拍摄的时候，你就只能看到尾巴是高亮度的了。确认针进入血管后再进药。 有些时候，我们需要研究在不同器官的分布，这样需要将器官取出来，个人认为用普通的小白鼠，就可以做这个。老鼠杀死后，需要把不同的器官以及肿瘤取出来，然后摆在玻璃片上，去拍照。 还一个非常重要的地方，就是数据处理。标尺一定要给出，不同的颜色代表多少的强度。 一些仪器具有积分功能，可以计算不同区域的浓度，比较有用的是可以出计算在器官中的分布。 附图是发表在在Biomaterials的文献 上面的文章是Methylene blue-encapsulated phosphonate-terminated silica nanoparticles for simultaneous in vivo imaging and photodynamic therapy Xiaoxiao He, Xu Wu, Kemin Wang*, Bihua Shi, Luo Hai 下面的是Synthesis, characterization, and in vivo targeted imaging of amine-functionalized rare-earth up-converting nanophosphors Li-Qin Xiong, Zhi-Gang Chen, Meng-Xiao Yu, Fu-You Li*, Chun Liu, Chun-Hui Huang |
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3楼2010-01-12 22:04:22
★★★★★ 五星级,优秀推荐
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很有价值~ 我也补充几点： 1、rhodamine是一个很大的荧光家族，有红光(如rhodamine B)也有绿光(如rhodamine 123)，所以购买时候要选择好。 2、Cy系统是一类比较常用的近红外染料。 3、生物体是有自发荧光的（如毛发、肠等），一定要用滤光片尽量扣除，所以才需要对照。 4、一个小细节就是做实验的时候如果同时有多只小鼠，每只小鼠的姿势要尽量摆的完全一样，图片才好看，不会让人觉得乱。 5、和激光共聚焦一样，活体成像的图片也是伪彩，不是真实颜色。 |
4楼2010-01-13 10:30:41