【求助】关于中药HPLC的问题，百思不得其解啊！ - 药学 - 药物分析

我们已经走的太远，以至于忘了为什么而出发

11楼2009-11-24 13:46:46

娟铝

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你用甲醇溶解样品，甲醇在200~210有吸收，建议你直接用乙腈溶解，此外，可用纯乙腈以0.2min/l速度冲一夜，第二天重做。

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12楼2009-11-24 14:18:31

kikie11111

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谢谢大家~那我这个203nm是紫外的末端吸收也没办法了是吧？

13楼2009-11-24 15:08:58

kikie11111

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那我的流动相换成甲醇行不行啊？不会分不开了吧？是不是色谱条件要重新考察？

14楼2009-11-24 15:13:35

kikie11111

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乙腈好像在200~210也有吸收。。。。

15楼2009-11-24 15:14:34

zxcd88

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从100%的乙腈下降时，，乙腈与水混合，会产生溶剂峰的，按照你的梯度，25分钟就开始有水加入，当乙腈-水的比例达到一个临界值时，这个溶剂峰就出来了，这种情况我也碰到过，要想去掉的话，只能把从25分钟开始的那个梯度取消掉，直接换成5%乙腈或者在很短的时间内（我的经验是1分钟内）完成切换

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16楼2009-11-24 15:59:07

kikie11111

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16楼，我觉得你说的很有道理，我明天试试，把最后那个梯度时间改短一些试试，如果不出峰，那它就是溶剂峰了！太感谢你啦！

17楼2009-11-24 16:40:08

seageat

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可怜的小MM学生物制药的结果来做天然药物分析，还遇到只有孤立双键的皂苷！液相也不听话！
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你遇到的总结为2个问题：
1.梯度切换后30min出峰，这是溶剂峰，100%乙腈洗脱时，在低波长210nm以下会出，毕竟乙腈的末端截止波长在200多，原因可能是乙腈和水的混合，也可能是水的问题（换乐百氏的纯洁水会好一些）。不过这不是大问题，在人参皂苷指纹图谱中就常有，一般都不计90-100%洗柱的图谱了，不影响分析。
2.皂苷类极性都较大，60%乙腈下都能洗脱出，而你的在100%以后才出（标准品），是不符合常理的，虽然不知道你具体做的是什么，但可肯定方法有问题。
那问题出在哪儿呢？0-20min，0-100%乙腈。。。。。。一般C18柱不能用纯水相平衡的，会造成疏水塌陷，也就是C18链卷曲，不具有分离效果。当然现在也有能用纯水的柱子了（一般都标有aque）就是贵一点。

————————结束语————————
1.文献没有报告过吗？方法不可能是0-100%的乙腈。定量分析最好能用等度，指纹图谱例外。
2.实在不行可以用ELSD检测器

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18楼2009-11-24 20:32:07