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kikie11111

木虫 (知名作家)

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虫号: 422993
注册: 2007-07-20
性别: MM
专业: 能源化工

[交流] 【求助】关于中药HPLC的问题，百思不得其解啊！

这两周一直在做HPLC，用的是waters的液相，反向C18柱，流动相是乙腈水溶液，紫外检测器，检测物质是皂苷类，检测波长为203nm，接近紫外末端吸收。现在出现一个奇怪的现象，就是每当我进样结束后冲柱子，冲柱条件是：0-20min，5%-100%乙腈；20-25min，100%乙腈；25-35min，100%-5%乙腈（我怕柱子冲不干净，所以梯度冲柱），在30min时总会出现一个色谱峰，峰高最低0.25，最高达到2，用标品进样后，采用的色谱条件下不出峰，在冲柱的30min时出峰，我很诧异，我以为是柱子没洗干净，我用这个冲柱条件连冲了三遍，都是在30min时出现一个峰高0.25左右的峰，这个“鬼峰”不可能是杂质，因为都冲了三遍柱子了，那它是什么？溶剂峰吗？还是其他什么？现在我很疑惑，也很郁闷，小木虫上的牛人多，大家帮忙解决下吧！

[ Last edited by kikie11111 on 2009-11-24 at 21:02 ]

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1楼2009-11-23 20:40:33

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seageat

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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专业: 天然药物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

可怜的小MM学生物制药的结果来做天然药物分析，还遇到只有孤立双键的皂苷！液相也不听话！
——————————————————
你遇到的总结为2个问题：
1.梯度切换后30min出峰，这是溶剂峰，100%乙腈洗脱时，在低波长210nm以下会出，毕竟乙腈的末端截止波长在200多，原因可能是乙腈和水的混合，也可能是水的问题（换乐百氏的纯洁水会好一些）。不过这不是大问题，在人参皂苷指纹图谱中就常有，一般都不计90-100%洗柱的图谱了，不影响分析。
2.皂苷类极性都较大，60%乙腈下都能洗脱出，而你的在100%以后才出（标准品），是不符合常理的，虽然不知道你具体做的是什么，但可肯定方法有问题。
那问题出在哪儿呢？0-20min，0-100%乙腈。。。。。。一般C18柱不能用纯水相平衡的，会造成疏水塌陷，也就是C18链卷曲，不具有分离效果。当然现在也有能用纯水的柱子了（一般都标有aque）就是贵一点。

————————结束语————————
1.文献没有报告过吗？方法不可能是0-100%的乙腈。定量分析最好能用等度，指纹图谱例外。
2.实在不行可以用ELSD检测器