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kikie11111

木虫 (知名作家)


[交流] 【求助】关于中药HPLC的问题,百思不得其解啊!

这两周一直在做HPLC,用的是waters的液相,反向C18柱,流动相是乙腈水溶液,紫外检测器,检测物质是皂苷类,检测波长为203nm,接近紫外末端吸收。现在出现一个奇怪的现象,就是每当我进样结束后冲柱子,冲柱条件是:0-20min,5%-100%乙腈;20-25min,100%乙腈;25-35min,100%-5%乙腈(我怕柱子冲不干净,所以梯度冲柱),在30min时总会出现一个色谱峰,峰高最低0.25,最高达到2,用标品进样后,采用的色谱条件下不出峰,在冲柱的30min时出峰,我很诧异,我以为是柱子没洗干净,我用这个冲柱条件连冲了三遍,都是在30min时出现一个峰高0.25左右的峰,这个“鬼峰”不可能是杂质,因为都冲了三遍柱子了,那它是什么?溶剂峰吗?还是其他什么?现在我很疑惑,也很郁闷,小木虫上的牛人多,大家帮忙解决下吧!

[ Last edited by kikie11111 on 2009-11-24 at 21:02 ]
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kikie11111

木虫 (知名作家)


不会没人知道是什么原因吧?那我惨了。。。。。
2楼2009-11-24 09:27:53
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diannao001

铁杆木虫 (小有名气)

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louyiceng(金币+1,VIP+0): 11-24 12:28
lcyhappy(金币+0,VIP+0):谢谢分享 11-24 14:31
首先要确定一下,你的样品在此流动相中的溶解度怎么样?你的样品是怎么配制的?会不会出现样品中成分滞留现象。
3楼2009-11-24 10:29:52
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wenzhiyong16

木虫 (小有名气)

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louyiceng(金币+1,VIP+0): 11-24 12:28
lcyhappy(金币+0,VIP+0): 11-24 14:31
从100%的乙腈下降时,,乙腈与水混合,会产生溶剂峰的,,可能30分钟时比例变化大的原因。
4楼2009-11-24 12:26:46
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kikie11111

木虫 (知名作家)


我的样品是用纯甲醇溶解,然后微滤的,流动相是乙腈水溶液。样品中成分滞留现象是什么意思?意思是我的样品在乙腈中溶解不好是吗?
5楼2009-11-24 12:34:12
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wenzhiyong16

木虫 (小有名气)

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jw227(金币+1,VIP+0):谢谢参与 11-24 15:12
你的柱子洗脱条件是怎么样的啊,,感觉溶解不好就不会在冲柱子时候一下子出来这么个大峰
6楼2009-11-24 12:40:48
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wenzhiyong16

木虫 (小有名气)

你的柱子洗脱条件是怎么样的啊,洗衣脱条件应该也是乙腈和水吧,感觉溶解不好就不会在洗衣脱时不出,而在冲柱子时候一下子出来这么个大峰,,你洗脱时不是梯度吗??
7楼2009-11-24 12:45:12
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kikie11111

木虫 (知名作家)


你的意思是乙腈的溶剂峰?那怎么处理啊?我的标品也跟那个溶剂峰一起出来的,主要是我的标品的波长是203nm跟乙腈的波长很接近。。。。
8楼2009-11-24 12:51:21
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kikie11111

木虫 (知名作家)


洗脱条件还在考察啊,也是用梯度洗脱,但是都是从低浓度乙腈到高浓度乙腈,样品出峰还不错,但是标品竟然不出峰,太诡异了!
9楼2009-11-24 13:02:49
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ccbright1016

金虫 (正式写手)


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lcyhappy(金币+0,VIP+0): 11-24 14:33
溶解样品的溶剂得溶解性要小于流动相得溶解性。如果大于将会有样品析出。出峰。这是不允许的。
检测池多久没洗了?
10楼2009-11-24 13:26:15
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