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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问菌落PCR产物可以直接用于酶切吗？
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ym3612003

铁杆木虫 (著名写手)

修己 慎独 思勤

[交流] 请问菌落PCR产物可以直接用于酶切吗？

各位高手专家，我想对菌根真菌18S gene建库，请问下我能不能在挑单菌落后直接进行菌落PCR,并用菌落PCR产物进行酶切鉴定？请各位大侠不惜赐教。谢谢啦。
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最想要去的地方，怎能在半路就返航！！！
1楼 2009-11-23 00:03:27
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-23 09:26
还是得回收吧
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2楼2009-11-23 08:23:39
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-23 09:26
胶回收再切才可以。
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但愿人长久
3楼2009-11-23 08:31:32
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anik

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢教诲 11-23 09:26
为何那么懒呢？
我对你所选取的步骤表示怀疑：
1、PCR结果，你如何能保证就是你的目的片断？
2、PCR为体外扩增，存在错配，如果正好是你的酶切位点的碱基变化，酶切不出来，那么就就是假阴性。
3，用PCR的结果进行酶切，其目的为何？能否证明你的问题？
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4楼2009-11-23 08:40:44
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09021122

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 11-23 09:26
一般情况下菌落PCR只是检测你挑的单克隆是否是阳性
而非用于基因的扩增，挑克隆摇菌才是扩增基因啊
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
5楼2009-11-23 08:45:50
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churmi

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
能省则省
可以！
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6楼2009-11-23 14:05:20
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌落PCR出来的不是你的目的基因吗？而且反应体系里面还有一些成分对酶切也会有影响的。
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霉菌
7楼2009-11-23 14:19:21
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liyong1981

金虫 (正式写手)
建议摇菌
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8楼2009-11-23 14:38:50
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王雨云

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想问一下，如果菌落PCR的结果是目的基因是否就不用做酶切鉴定了，感觉如果菌落PCR的结果是目的基因就可以直接穿刺测序了，节省试验时间，呵呵！
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9楼2009-11-23 15:23:58
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neon_alone

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我认为最好进行两步鉴定：
1.菌落PCR鉴定，可以直观看出你的产物是否连接上，并且成功转化
2.提质粒，然后酶切，而不是对PCR产物酶切，确保连接上的确实是目的片段，而不是大小接近的其他，防止假阳性结果
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10楼2009-11-23 15:30:33
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