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WB实验步骤
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WB实验全流程与小技巧，一文搞定！ 为了帮助大家更好地进行WB实验，我们整理了一份详细的实验流程和小技巧，供大家参考： 实验流程： 细胞或组织蛋白抽提 电泳分离蛋白质 转膜、抗体杂交 显影 实验要点： 样品制备： 细胞：弃去培养上清液，用无菌PBS清洗1-2遍，加入细胞裂解液（80-100ul/60mm dish）和蛋白酶抑制剂，摇床上摇动裂解，注意随时观察。最好在冰上裂解。 组织：将组织块切割成合适大小，用无菌PBS漂洗1-2遍，加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂，用高速匀浆机匀浆或组织破碎仪破碎。最好在低温下裂解。 去除碎片：在4℃下以12000rpm离心10-20min，取上清液。 蛋白定量：使用BCA法测定蛋白浓度后分装。 Western Blotting基本概念： Western Blotting是一种蛋白质检测技术，通过将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定蛋白。操作流程如下： 细胞或组织 蛋白抽提 电泳分离蛋白质 转膜、抗体杂交 显影 Western Blotting实验操作要点： 样品制备：细胞和组织蛋白抽提的方法如上所述。 电泳分离蛋白质：使用SDS-PAGE电泳分离蛋白质。 转膜、抗体杂交：将分离后的蛋白质转移到NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体进行杂交。 显影：根据杂交结果进行显影。 希望这些信息能帮助大家顺利完成WB实验！ 发自小木虫手机客户端 |
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