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【分享】经验：色谱柱的平衡和使用！！
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反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇(或乙腈)/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。 如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高(约95%)的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。 另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。 如何平衡色谱柱： 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡)。 色谱柱的再生： 建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱规格 柱体积 溶剂体积 150×4.6 2.50ml 50ml 250×4.6 5.0ml 100ml 250×10 20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法： 极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水 非极性固定相(如反向填料C18，C8等)的再生：水—乙腈—氯仿(或异丙醇)—乙腈—水 中药有效成分常见色谱前处理方法 液相色谱手动进样阀的使用和保养 [ Last edited by ztj970831 on 2009-11-21 at 10:48 ] |
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5楼2009-11-22 09:58:06
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