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ztj970831

[交流] 【分享】经验:色谱柱的平衡和使用!!

反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色谱柱在运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。

  如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用含水量很高(约95%)的流动相过渡,样品分析完后,冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗,对于非极性柱,如C8或C18,由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链,造成柱效下降。

  另外,分析样品时,由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜,出现样品不保留而分不开,重现性差,所以对于一般的C18或C8,有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。

  如何平衡色谱柱:

  平衡过程中,将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间平衡)。

  色谱柱的再生:

  建议用来冲洗的溶剂体积

  色谱柱规格 柱体积 溶剂体积

  150×4.6 2.50ml 50ml

  250×4.6 5.0ml 100ml

  250×10 20ml 400ml

  请根据下表选择您的再生方法:

  极性固定相(如Si,NH2,Diol色谱填料)的再生:正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水

  非极性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水—乙腈—氯仿(或异丙醇)—乙腈—水


中药有效成分常见色谱前处理方法


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[ Last edited by ztj970831 on 2009-11-21 at 10:48 ]
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谢谢分享!
2楼2009-11-21 11:24:10
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小不点_13

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
happy169(金币+0,VIP+0):你好!求助问题可以自行开贴!跟帖求助有时候很多虫友是看不到的! 11-21 16:44
请教楼主,做凝胶渗透色谱,也就是水相的GPC。我一个老师要求做后对柱子保护药使用除菌剂,我想知道一般用什么,还有对柱子的填料和柱效没影响吗?而且是一直就这么保护着的。还有进一次样后基线归零之后还要平才能进的,但是有时会出现很难平。时间太久又怕和前样的实验条件不一致
最重要的还是做好我们自己的事情
3楼2009-11-21 14:00:37
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muchonghh

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):新虫回帖奖励,欢迎常来分析版 11-21 23:53
太感谢了,很实实用的资料啊!!
4楼2009-11-21 20:45:12
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ycybw

木虫 (著名写手)

henhaoxiele
5楼2009-11-22 09:58:06
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xiaofang5288

铁虫 (小有名气)

好东西,谢谢分享
6楼2009-11-22 11:31:22
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kuuikaifeng


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不错,不错,好资料!!
7楼2009-11-22 14:25:52
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bhnchnuo


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不错的资料!!学习不少哦!!呵呵!!!
8楼2009-11-23 10:35:59
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njyyyil

好资料,学习了
9楼2009-11-24 13:57:58
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ttkl533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2009-11-25 10:30:44
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