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你养的细胞还是你以为的那株吗？
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持续半个世纪的交叉污染危机 1960 年代后期，美国实验室里绝大多数连续细胞系，已经被 HeLa 污染了。1967 年 Gartler 从酶多态性研究第一次把这事抖出来，1977 年 Nelson-Rees 用染色体分析坐实。按《动物细胞培养：基本技术和特殊应用指南》原书第七版第十三章的记录，到现在 ICLAC（国际细胞系认证委员会）数据库里已经积累了 470 多个身份错误的细胞系。 CHANG Liver 标着人胚胎肝上皮，其实是 HeLa； ECV-304 说是正常内皮，其实是 T-24 膀胱癌； EJ-1 膀胱癌其实就是 T-24； BrCA5 乳腺癌也是 HeLa。 更讽刺的是，1967 到 1977 年那批被污染的细胞系，至今还在被广泛使用、还在发文章。这是教科书级别的反面教材，可惜很多实验室没把它当回事。 为什么这事这么难治 交叉污染的细胞往往长得更快、贴壁率更高，而这些让它成为好材料的特质，恰恰也是它容易污染别的东西的特质。一旦混进去，它会在传代里慢慢盖过你真正的细胞。 用错了身份的细胞做实验，只要结论不涉及细胞来源，分子机制可能还成立；可一旦你想把细胞行为和它出身的组织或肿瘤挂钩，整个结论就废了。更糟的是，发都发了，只能回头补做鉴定、改名字（比如 HeLa-KB、HeLa-Hep2）来补救。 如何鉴定 那怎么知道自己的细胞对不对。首选是 DNA STR 谱，用微卫星短重复序列，PowerPlex 16HS 一次测 16 个位点，分辨能力到 1 比 10 的 18 次方，还有 ANSI/ATCC ASN-0002-2011 国际标准和公开的数据库可以交叉比对。 判读规则是：和正确细胞系 80% 以上匹配算真实；和另一个不同细胞系匹配，说明身份错了，别再用；找不到 80% 以上匹配，反而提示它可能是独一无二的。 书里给过一个估计：高达 36% 的细胞系和所称不符。这是花一次 STR 测序就能排掉的雷。不过 STR 有个盲区，如果人源培养物被另一种动物交叉污染，STR 电泳图只会显示峰值降低、把污染种属的信息整个吞掉，所以还得配种属鉴定，比如测 CO1 细胞色素氧化酶亚基 1 的条码区域，和公共数据库比对。 如何预防 比鉴定更根本的是预防，而预防是操作习惯，不是某种检测。 书里列了十三条实践，核心就几条： 一次只处理一个细胞系、做完擦干净再碰下一个； 增殖快的细胞系放到最后处理； 绝不用同一支加样器处理不同细胞系； 每种细胞系专用一套培养基和试剂； 吸管进过有细胞的瓶就不再放回培养基或胰酶瓶； 冻存标记清楚、复苏别拿错管。 这些不是发表前补一下的事，而是拿到细胞系第一天就该嵌进日常的。拿到新细胞系之前，先去 ICLAC 数据库查一遍，从有声誉的细胞库取，收到后立即做 STR 验证。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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