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双酶切酶连，如何才能获得好用的连接骨架？
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各位大佬好，本人分子小白，现在遇到一些问题想请教一下大家。 大致情况：双酶切，酶切后的骨架约10000bp，条带约1400bp，比例约1：10计算。 在与同门同时进行操作，提质粒，酶切，胶回收，酶连，操作步骤基本相同，酶切前A260/280,A260/230数值都正常，双酶切电泳后的片段大小也正常，无杂带。但是最后的酶连转化效果天差地别，我的质粒连接效率很差，转化后长的克隆极少。我尝试了多次都是这样，而同门大概率成功，小概率失败。 于是我进行了比较实验，1.我的片段，我的骨架、2.我的片段，同门的骨架、3.同门的片段，我的骨架、4，同门的片段，同门的骨架。2，4组合的效果都不错，使用我的骨架都不怎么长克隆。 这究竟是为什么呢？如何获得好用的骨架载体呢？  |
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