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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 配制非变性PAGE5%浓缩胶，无法凝固，是什么原因？
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xinrui_309

新虫 (小有名气)

[交流] 配制非变性PAGE5%浓缩胶，无法凝固，是什么原因？

我参照书上的公式算好了，但是胶凝结不住，一直是略带粘性的液体，加TEMED也不行，不知道问题出在哪里？溶液也重新配了，还是那样。谁知道问题在哪里？
我的配法是：溶液A：30g丙烯酰胺,0.8g双丙烯酰胺，加蒸馏水至100ml，搅拌至完全溶解。
溶液C：6.0gTris溶于40ml蒸馏水，加盐酸至PH6.8，加蒸馏水至100ml。
配4ml  5%浓缩胶的：A液0.65ml，C液1.0ml，蒸馏水2.3ml，10%AP 30ul，TEMED 5ul
请哪位大侠帮看看问题出在哪里？
另外，分离胶有点软，是什么问题？
谁能提供详细的非变性的PAGE 10%分离胶和5%浓缩胶的配方?
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1楼 2009-11-19 20:49:13
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小小豆豆

金虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-22 21:05
加tbe了吗，没见你写啊

[ Last edited by 小小豆豆 on 2009-11-19 at 21:17 ]
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2楼2009-11-19 21:13:29
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anik

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):maybe 11-22 21:05
APS放置时间是否过长？
苔黑酚（？）是否被氧化？
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3楼2009-11-19 21:56:54
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xuezhen

银虫 (小有名气)
关注中！
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4楼2009-11-19 23:29:54
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢分享经验 11-22 21:05
还有一个可能就是你配完胶之后没有摇匀，导致下面的胶凝了，而上面的很稀凝不住，我以前就遇到这种情况。
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5楼2009-11-20 10:47:02
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wccc

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+0,VIP+0):同意 11-22 21:05
胶不凝主要考虑两个试剂，APS与TEMED.
APS是否潮解？
TEMED是否过期？
还可以尝试逐步加大TEMED的量。
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6楼2009-11-22 20:27:31
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扁舟1225

铜虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢 11-22 21:06
你可以加热试试，因加热可加速凝胶，若凝，则试剂没问题，只是时间的问题，若不凝则其中某种或某几种试剂有问题，这样的话你要依次试试APS,TEMED,A液,Tris，看看是否是他们其中一种不能用了。
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7楼2009-11-22 20:48:05
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chowchangfat

铜虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):支持 11-22 21:06
AP配置的时间不宜过长，可以加大TEMED的量，20ul我试过，但要较迅速的灌胶，否则会在灌胶的过程凝固
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8楼2009-11-22 21:02:31
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vivienxixi

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一定要摇匀，定容后混匀。。
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9楼2009-11-22 22:14:17
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)
★
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我同样的4ml浓缩胶体系，用的是50微升的AP，15微升的temed，大概放置一个小时可以凝固，但是为了使梳孔整齐可以放两个小时
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10楼2009-11-23 10:58:19
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