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生物民工wws

新虫 (初入文坛)

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[交流] 分享一款实验室长期在用的 TEV 蛋白酶，蛋白纯化党可以参考下已有1人参与

做重组蛋白纯化、结构生物学的小伙伴应该都懂，切标签真的很容易踩坑。之前试过不少 TEV，要么一碰到咪唑活性直接崩，洗脱完还得透析换缓冲液，多一步操作蛋白就多损失一点；有的只能 30℃左右切，一些弱稳定蛋白常温放几小时直接降解；还有些杂切严重，跑完胶目标条带碎得厉害，后续结晶、功能实验全受影响。

我们课题组这大半年一直在用一款 TEV 蛋白酶，日常大批量纯化都靠它，顺手整理了实测情况给大家做个选型参考。

简单说下基础情况：浓度是 10 KU/mL，蛋白纯度 90% 以上，分子量 28.3 kDa，平时一般分 1000U 和 5000U 两种规格，-20℃存放一年活性基本没明显衰减。酶活标准也好理解：pH8、30℃环境下，1 单位酶一小时能切开超 85% 的对照底物，切割效率很稳定。

实际用下来最省心的几点：
1.耐咪唑、耐高盐这点真的刚需，Ni 柱洗脱液不用额外处理，直接加酶孵育就行，省去透析步骤，低丰度蛋白再也不用心疼损耗；NaCl、KCl 这类常规缓冲盐体系也完全兼容。
2.温度适配范围很宽，4℃低温过夜慢切、37℃快速处理都没问题。遇到容易变性的蛋白就低温温和切割，赶实验进度就常温短时反应，灵活性很高。
3.识别位点专一，只认 ENLYFQG 序列，几乎不会乱切蛋白，跑完电泳条带干净，对做晶体、蛋白功能研究特别友好。

平时我们配的通用缓冲体系：50 mM Tris-HCl pH8.0 + 150 mM NaCl，用来稀释酶做反应适配绝大多数蛋白。

顺便客观说下使用局限，避免大家踩雷：体系里如果有高浓度尿素、盐酸胍这类强变性剂，酶活会快速失活；另外酶液不要反复冻融多次，最好提前分装，随取随用，活性保存得更好。

如果有同行现在正在筛选蛋白酶、做融合标签切除，想要拿少量样品做平行对比预实验，欢迎站内私信我，咱们可以聊聊不同蛋白的酶切条件优化。大家平时切标签遇到什么难题、好用的小技巧也可以在楼下留言一起交流～

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