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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题

1、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都是以mRNA为模板,还是以第一链cDNA为模板的呢??
2、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都要使用呢??还是只使用一种技术就可以了呢??

期待高手的答复,希望回复的详细一点,谢谢,在线等....

[ Last edited by amisking on 2009-12-23 at 12:22 ]
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liyong1981

金虫 (正式写手)



pidou(金币+1,VIP+0):谢谢,虽然不是完全明白,但是慢慢消化吧 11-19 12:47
你设计的引物和锚定引物,会得到完整序列的,我说了,5RACE自己做的话,UTR很难做得出来的,5端帽子很容易降解掉的。或者买个宝生物的试剂盒吧,简单点~引物设计很重要,可以一次多合成几对,都跑跑看。

混合物么,就是你逆转录的过程中,难免会有其他的的片段,因为你第一步是加的逆转录酶啊,做RACE的时候有特定引物,就会指数倍的扩增你的目的片段

一般3RACE自己做,2天搞定,5RACE就看你的技术和运气了

GOOD LUCK~
8楼2009-11-19 12:33:08
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liyong1981

金虫 (正式写手)



pidou(金币+1,VIP+0):希望高手继续相助 11-19 11:41
不管3还是5都要mRNA做模板的,先逆转录第一链即可,然后用第一链做RACE。获得CDNA全长肯定要两断都要做了!个人认为3RACE容易出啦,因为你有polyA锚定引物。5RACE一般很难做出完整的5端上游序列,即使用试剂盒。但扩出你需要的ORF一半冒得问题。
2楼2009-11-19 11:04:02
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liyong1981

金虫 (正式写手)


或者送公司做,RACE传统的方法做,很折磨人~
3楼2009-11-19 11:05:40
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小白3521

金虫 (小有名气)

我的3‘和5’race用的takara的试剂盒,3’比较好做一点,步骤也比较少,5‘复杂一些,都需要用RNA转录成带有试剂盒中的接头引物的cDNA,再P,然后用你获得的5’和3’序列拼接成你的全序列,设计引物,在普通的cDNA中扩全长基因
4楼2009-11-19 11:13:56
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