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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题

1、在获取cDNA全长的时候，5‘-RACE和3’-RACE都是以mRNA为模板，还是以第一链cDNA为模板的呢？？
2、在获取cDNA全长的时候，5‘-RACE和3’-RACE都要使用呢？？还是只使用一种技术就可以了呢？？

期待高手的答复，希望回复的详细一点，谢谢，在线等....

[ Last edited by amisking on 2009-12-23 at 12:22 ]
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1楼 2009-11-19 10:57:41
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pidou

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-19 11:49:
扩增出来的第一链CDNA不需要是mRNA的完全克隆啊。后面设计的引物做RACE才是可以扩全长的啊！~
逆转录的CDNA第一链本来就是混合物~
拼接么，很简单的，测序后比较下就OK了啊，或者在你认为的ORF内，在扩增出的3和 ...

那你说的混合物是什么意思呢？？是什么和什么的混合物呢？？如果cDNA不是mRNA的全长反转录的话，那么再做5‘和3‘时候的模板（cdna）就不是完整的，又怎么能最后测出cDNA的全长呢？？
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7楼2009-11-19 12:27:09
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
pidou(金币+1,VIP+0):希望高手继续相助 11-19 11:41
不管3还是5都要mRNA做模板的，先逆转录第一链即可，然后用第一链做RACE。获得CDNA全长肯定要两断都要做了！个人认为3RACE容易出啦，因为你有polyA锚定引物。5RACE一般很难做出完整的5端上游序列，即使用试剂盒。但扩出你需要的ORF一半冒得问题。
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2楼2009-11-19 11:04:02
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liyong1981

金虫 (正式写手)
或者送公司做，RACE传统的方法做，很折磨人~
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3楼2009-11-19 11:05:40
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小白3521

金虫 (小有名气)
我的3‘和5’race用的takara的试剂盒，3’比较好做一点，步骤也比较少，5‘复杂一些，都需要用RNA转录成带有试剂盒中的接头引物的cDNA，再P，然后用你获得的5’和3’序列拼接成你的全序列，设计引物，在普通的cDNA中扩全长基因
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4楼2009-11-19 11:13:56
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