24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2875  |  回复: 15
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题

1、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都是以mRNA为模板,还是以第一链cDNA为模板的呢??
2、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都要使用呢??还是只使用一种技术就可以了呢??

期待高手的答复,希望回复的详细一点,谢谢,在线等....

[ Last edited by amisking on 2009-12-23 at 12:22 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-19 11:04:
不管3还是5都要mRNA做模板的,先逆转录第一链即可,然后用第一链做RACE。获得CDNA全长肯定要两断都要做了!个人认为3RACE容易出啦,因为你有polyA锚定引物。5RACE一般很难做出完整的5端上游序列,即使用试剂盒。但 ...

1、可是第一链cDNA是mRNA的完全克隆吗??那用反转录酶多克隆点,再测序不就知道cDNA的序列了吗??
2、5‘-和3’-RACE都做完后,怎么即将这两个连接成一条完整的cDNA 呢??
5楼2009-11-19 11:41:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

liyong1981

金虫 (正式写手)



pidou(金币+1,VIP+0):希望高手继续相助 11-19 11:41
不管3还是5都要mRNA做模板的,先逆转录第一链即可,然后用第一链做RACE。获得CDNA全长肯定要两断都要做了!个人认为3RACE容易出啦,因为你有polyA锚定引物。5RACE一般很难做出完整的5端上游序列,即使用试剂盒。但扩出你需要的ORF一半冒得问题。
2楼2009-11-19 11:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


或者送公司做,RACE传统的方法做,很折磨人~
3楼2009-11-19 11:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

我的3‘和5’race用的takara的试剂盒,3’比较好做一点,步骤也比较少,5‘复杂一些,都需要用RNA转录成带有试剂盒中的接头引物的cDNA,再P,然后用你获得的5’和3’序列拼接成你的全序列,设计引物,在普通的cDNA中扩全长基因
4楼2009-11-19 11:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +11 山阿蔓 2026-04-07 11/550 2026-04-14 14:21 by 不我拉绿卡
[考研] 290调剂生物0860 +29 哇哈哈,。 2026-04-11 32/1600 2026-04-14 13:49 by 陈皮皮
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +38 xaw. 2026-04-11 39/1950 2026-04-14 13:04 by wanganpin
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +7 河南农业大学-能 2026-04-14 7/350 2026-04-14 11:48 by lbsjt
[考研] 药学305求调剂 +4 玛卡巴卡boom 2026-04-11 4/200 2026-04-14 10:21 by dick_runner
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 277 数一104,学硕,求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 071000生物学调剂求助 +17 zzzzwww 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 15:55 by 求调剂zz
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见