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pidou

木虫 (正式写手)

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注册: 2007-10-27
专业: 植物化学保护

[交流] 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题

1、在获取cDNA全长的时候，5‘-RACE和3’-RACE都是以mRNA为模板，还是以第一链cDNA为模板的呢？？
2、在获取cDNA全长的时候，5‘-RACE和3’-RACE都要使用呢？？还是只使用一种技术就可以了呢？？

期待高手的答复，希望回复的详细一点，谢谢，在线等....

[ Last edited by amisking on 2009-12-23 at 12:22 ]

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1楼 2009-11-19 10:57:41

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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性别: MM
专业: 疫苗学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

如果想获得全长，目前RACE技术是必需的，通常提取总RNA，然后获得mRNA（此步骤可以选作），然后一般是合成用于3RACE的cDNA，再根据同源序列设计一个锚定引物和PolyT引物做3‘RACE，获得扩增产物后，电泳切胶回收，克隆测序，然后根据测序结果设计一个5’RACE的锚定引物和鸟苷酸帽子特异引物（这个目前都有新的专利），扩增出目的产物，回收克隆测序后，将两段拼接起来获得全长。

我现在正在进行这项工作，我买了clonetech的试剂盒，这是很多有经验人士给我推荐的，看了很多文章也多数使用这个盒子，盒子使用的RNA模板推荐是mRNA，但是总RNA也是可以的