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[资源] 梳理Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins在类器官培养中的应用场景

类器官(organoids)能够高度再现真实组织细胞的关键性能和复杂形态,在疾病建模、药物筛选和再生医学领域具有应用潜力。在类器官构建过程中,经典的细胞因子组合方案:wenr(或称为wner)常常被用到。这一经典方案由荷兰hubrecht研究所的hans clevers教授团队于2010年开发。

wenr方案的核心组分包括wnt-3a、egf、noggin和r-spondins。作为一家专注于为全球生物医药领域提供生物试剂和技术服务的高新技术企业,义翘神州自主开发高质量的wenr系列细胞因子,具有低内毒素、高批间一致性、高生物活性等特点,满足您的多种类器官培养需求。
梳理Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins在类器官培养中的应用场景


细胞因子应用场景
wenr方案与wnt、mapk/erk、bmp等信号通路相关,是维持干细胞自我更新和分化的关键。

wnt-3a
经典wnt通路的激活剂,启动下游c-myc、cyclin d1等基因的表达,促进细胞发育、增殖和分化。

egf
与受体结合,激活mapk/erk通路。egf刺激上皮细胞增殖、血管生成和表皮细胞分化,促进类器官三维结构的形成。

noggin
通过阻断bmp与受体结合,促进干细胞增殖,为类器官形成提供充足的细胞。还能通过抑制bmp信号通路,维持干细胞干性,影响细胞的命运决定和分化过程。

r-spondin
wnt信号通路的激活剂,增强wnt信号在多种组织中的表达,促进干细胞增殖与类器官结构形成。
梳理Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins在类器官培养中的应用场景-1

wenr方案使用指南
wnt通路的激活、bmp通路的抑制、egfr和fgfr的刺激,有利于维持基底细胞和肺泡Ⅱ型细胞的干性。因此wenr方案中的wnt-3a、egf、noggin、r-spondin 1对气道类器官和肺泡类器官的培养十分重要。

但在肿瘤类器官培养过程中,细胞因子的使用需要有所调整。比如90%以上的结直肠癌中wnt相关蛋白的表达量会上升,所以在构建这类类器官时,培养基中去除wnt-3a、r-spondin 1等细胞因子,不会影响类器官的增值和扩增。研究发现,在肺癌类器官构建的培养基中是否添加wnt-3a,不影响成功率。

在类器官的培养过程中要合理使用wenr方案。wnt-3a需要与r-spondin共同使用,才能达到理想的效果。wnt信号通路过度激活会导致类器官结构紊乱,wnt-3a的浓度一般控制在50-100 ng/ml,可根据类器官种类进行优化和动态调整。r-spondin有4种亚型,需结合类器官的组织来源进行特异性选择。

noggin也与wnt-3a协同作用,比如在肝类器官中,两者联合使用是长期传代的需求。在肺类器官培养中,noggin缺失会导致肺泡上皮细胞过早分化。而bmp信号的过度激活会导致类器官形成囊状结构,失去功能性隐窝结构。noggin常用于胃、肠道、肝脏、肺、胰腺等类器官的长期培养。

高浓度egf可能会诱导异常分化,一般使用浓度为50 ng/ml,并建议定期更换培养基。在肿瘤类器官(如肠癌)中,其浓度需根据癌细胞特性调整。egf易被蛋白酶降解,建议使用无血清培养基。

常见问题排查表(仅供参考)
梳理Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins在类器官培养中的应用场景-2

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