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「1图1表格」从Mallory到Masson染色：洞察肌纤维免疫组化三颜色的奥秘
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 如果你着急去染色，看完图片保存好，就撤吧。 如果你认为内容有帮助，点个赞或推荐再走吧。 接下来我们将会开启“废话”模式，在图片内容的基础上，唠一唠masson三色染色法的历史、染色原理、核心操作步骤的关键机制。 一、百年传承：从mallory到masson 1880年代，美国病理学家frank burr mallory首次在组织切片的染色过程中使用苯胺蓝（aniline blue），目的是让组织中的胶原纤维显色。但是该技术仅能粗略显色纤维结构，不能区分纤维类型。 1929年，法国/加拿大病理学家claude l. pierre masson对mallory法进行改良，实现了三色体系：细胞核呈现蓝黑色，胞质、肌纤维为红色，胶原纤维为蓝色或绿色。时至今日，masson三色染色仍被《theory and practice of histological techniques》（第8版）收录，是结缔组织染色领域的参考方法之一。 二、masson染色技术原理拆解 因为染料分子大小与组织渗透性存在差异，在masson染色过程中，先将多种成分染成红色，再通过选择性分化去除胶原中的红色，接着用苯胺蓝将胶原纤维染成蓝色，与肌纤维形成鲜明的颜色对比。 整个染色过程可以拆分为四步： 01核染 weigert铁苏木素与dna稳定结合。铁离子的存在增强了染料结合的稳定性，在后续酸性环境中不掉色。 02胞质红染 酸性品红-丽春红与细胞质中的蛋白质通过静电结合，肌纤维、胶原纤维等被染成红色。其中丽春红分子量大，结合牢固，酸性品红分子量小，渗透性强，二者协同作用使细胞质着色均匀。 03磷钼酸分化 磷钼酸在masson染色中具有双重作用，既是选择性分化剂又是媒染剂，实现胶原纤维与肌纤维清晰区分的关键。磷钼酸可以置换出胶原纤维中的红色染料，但不能从致密的肌纤维和细胞质中去除该染料。磷钼酸中的酸性基团可作为桥梁，连接去色后的胶原纤维与后续染料，增强其结合力，提高染色对比度。 04终染 苯胺蓝或亮绿属于大分子酸性阴离子染料，与胶原纤维形成稳定复合物，将其染成蓝色或绿色，实现与肌组织、细胞质的色彩区分。 三、masson配方详解：从“抄配方”到“懂配伍” 目前商用试剂很成熟，价格也不高，建议大家直接买就行。 如果非要自己配置，可以参考下列配方： 1. weigert氏铁苏木素液 a液：苏木素1g+无水乙醇100ml b液：30%三氯化铁水溶液4ml + 蒸馏水95ml + 盐酸1ml 现用现配。使用时将a液和b液等量混合，混合后溶液呈紫黑色。提前配会氧化失效。 2. 丽春红酸性品红液 丽春红0.7g，酸性品红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml，溶解后过滤。 冰醋酸用来调ph，避免染料沉淀，染色效果更稳定 3. 1%磷钼酸溶液 磷钼酸1g加蒸馏水99ml，充分溶解后过滤备用。 正常为淡黄色，变蓝会失效，需要重新配 4. 2%苯胺蓝染液 苯胺蓝2g加蒸馏水98ml，再加冰醋酸2ml，充分溶解后过滤备用。 可以换成1%亮绿染液，亮绿1g+蒸馏水98ml+冰醋酸2ml 5. 1%盐酸酒精分化液：浓盐酸1ml加无水乙醇99ml，混合均匀。 6. 1%盐酸终止液：浓盐酸1ml加蒸馏水99ml，混合均匀。 masson通过核染、红染、选择性分化、终染四步递进的染色过程，实现细胞核、肌纤维与胶原纤维的三色区分，是结缔组织病理染色的经典免疫组化实验之一。 |
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2026-05-19 13:24:37, 420.63 K
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