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蛋白质纯化检测器异常问题 已有1人参与
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蛋白纯化检测器异常，在使用尿素、咪唑等溶液洗脱时，检测色谱图达到400~500的高背景，直接影响目标蛋白的观察，可能是什么原因，怎么解决？是检测器本身的问题吗？ 另外，在换洗脱液的时候，会出现明显的高吸收峰，没有进气泡，是将恒流泵暂停换液后重新打开的，可能的原因是什么？怎么解决呢？ |
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2楼2026-06-17 09:47:04
3楼2026-10-07 14:13:41
xinboTNT4BH
铁虫 (初入文坛)
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- 专业: 遗传学与生物信息学
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首先，咪唑本身是有吸收峰的，但是直接到500，有可能是溶液里面不纯，含有杂质（或细菌滋生，或其它溶液污染）； 可以试着先清洗纯化仪，1M NaOH溶液标准清洗法，紫外调零后，单独用全新配置的咪唑溶液不过柱子跑一遍，确定溶液是否纯净；之后挂上干净的柱子再跑，大概率是溶液本身不纯的问题。 换洗脱液出现的高吸收峰，我怀疑是溶液中溶解的空气，在之前实验中，缓慢溢出聚集在了仪器上，形成的气泡，虽然你没有在后续过程中进气泡，但是由于汇集的气泡残留在机器里，蠕动泵在暂停时候引力拉伸气泡，这个气泡正好出现在紫外检测器上，可能就形成了缓慢变化的吸收峰； 每瓶溶液在进入机器前，先进行超声除气泡，这个步骤可以极大减少这个问题的出现；如果已经产生气泡了，可以用系统清洗的办法，试着冲掉那个残留在紫外检测器上的气泡。 还有其它问题可以联系我：15821572946， 微信同号。 |
4楼2026-11-09 15:04:43
