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wangjinna

银虫 (正式写手)

[交流] PCR电泳出现空白条带,帮忙分析

我的目的基因300多bp,PCR后进行电泳,结果在小于100bp处,模板DNA和空白均出现了很亮的条带,目的基因却没有跑出来。
我用的简并引物,两条引物的兼并性均为64.
PCR条件:94  4min,94  1min,44  40s,72  40s,72  10min
请大家帮忙分析下
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09021122

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
空白处怎么会出现条带呢 是不是点样时出现了错误。
你那退火温度是不是要变一下!
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
2楼2009-11-17 20:01:37
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zzw1221

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火温度太低了吧,44度,好像很少用到这么低的温度的
3楼2009-11-17 20:21:04
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gynan123

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
350784478(金币+1,VIP+0): 11-17 21:05
我觉得有两种可能,一是是否含有其他杂质污染,二是引物二聚体的条带。建议重新设计引物
4楼2009-11-17 20:22:34
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
350784478(金币+1,VIP+0): 11-17 21:06
肯定是引物二聚体啦
简并引物扩不出东西很正常吧
重新设计引物呗
Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
5楼2009-11-17 20:26:08
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350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gynan123 at 2009/11/17 20:22:
我觉得有两种可能,一是是否含有其他杂质污染,二是引物二聚体的条带。建议重新设计引物

基本上同意他的说法,要是你的CDNA没有问题的话,那你就找找上面的原因,你可以先用别人已经跑成熟的内参来试一下。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
6楼2009-11-17 21:06:46
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lulu-yaqi

金虫 (小有名气)

引物特异性不好
相信自己
7楼2009-11-17 22:16:06
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