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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR电泳出现空白条带，帮忙分析
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wangjinna

银虫 (正式写手)

[交流] PCR电泳出现空白条带，帮忙分析

我的目的基因300多bp，PCR后进行电泳，结果在小于100bp处，模板DNA和空白均出现了很亮的条带，目的基因却没有跑出来。
我用的简并引物，两条引物的兼并性均为64.
PCR条件：94  4min，94  1min，44  40s，72  40s，72  10min
请大家帮忙分析下
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贝姬任何打击都熄灭不了的热情
1楼 2009-11-17 19:09:13
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09021122

木虫 (正式写手)
★
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空白处怎么会出现条带呢 是不是点样时出现了错误。
你那退火温度是不是要变一下！
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
2楼2009-11-17 20:01:37
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度太低了吧，44度，好像很少用到这么低的温度的
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3楼2009-11-17 20:21:04
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gynan123

金虫 (小有名气)
★ ★
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350784478(金币+1,VIP+0): 11-17 21:05
我觉得有两种可能，一是是否含有其他杂质污染，二是引物二聚体的条带。建议重新设计引物
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4楼2009-11-17 20:22:34
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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350784478(金币+1,VIP+0): 11-17 21:06
肯定是引物二聚体啦
简并引物扩不出东西很正常吧
重新设计引物呗
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Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
5楼2009-11-17 20:26:08
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350784478

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by gynan123 at 2009/11/17 20:22:
我觉得有两种可能，一是是否含有其他杂质污染，二是引物二聚体的条带。建议重新设计引物

基本上同意他的说法，要是你的CDNA没有问题的话，那你就找找上面的原因，你可以先用别人已经跑成熟的内参来试一下。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
6楼2009-11-17 21:06:46
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lulu-yaqi

金虫 (小有名气)
引物特异性不好
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相信自己
7楼2009-11-17 22:16:06
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