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hxdon铜虫 (著名写手)
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[交流]
酵母单双杂交
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在看一篇文献，是这样写的： 单双杂交体系融合了酵母单杂交和双杂交体系的原理，又同时应用DNA-蛋白质以及蛋白质-蛋白质之间的相互作用筛选CDNA文库。如果DNA结合序列以及与DNA序列相互作用的转录因子均为已知，就可以用该系统筛选新的转录因子了。 希望高手解释一下： 1第一句话中说的筛选CDNA文库是怎么实现的，从理论上帮我理一理。 2 第二句话中说的转录因子已知，是指它的蛋白结构还是已经纯化好了这个蛋白，就是说“已知”是指具体的什么已知了！ |
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3楼2009-11-16 14:23:35
caidzh
金虫 (正式写手)
X战虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1244.1
- 帖子: 404
- 在线: 28.4小时
- 虫号: 709126
- 注册: 2009-02-26
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
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酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 基因表达由转录激活剂来激活，转录激活剂通常由DNA结合结构域和激活结构域组成，这两部分有不同的基因编码。可将人蛋白基因与酵母激活因子DNA结合结构域基因相连，转化酵母后可产生由人蛋白和酵母转录激活剂部分结构组成的融合蛋白；若将多种待测人蛋白基因与编码转录激活剂激活结构域的基因相连，转化酵母则可产生多种融合蛋白。酵母双杂交技术即将上述两种克隆混合同时转染酵母，产生的人蛋白质之间如可相互作用，则可使转录激活剂DNA结合结构域和激活结构与相互靠近，激活RNA多聚酶，表达某种报告基因（易于检测）。因此可以通过报告基因的检测来推断研究蛋白质之间的相互作用。 |
2楼2009-11-16 14:00:41