24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 967  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] pcr 扩增问题

pcr 扩增问题

以下是我让我头痛的问题,咱是个新手,望各位指教,谢谢!
问题1. 我是提取感病植物总RNA,用RT-PCR扩增病毒全长序列——约10kb,第一次提取的RNA能扩出全长,可最近几次提的RNA,用相同的方法再也扩不出来了。
问题2. 我分别用第一次扩得全长的PCR产物和胶回收产物都不能扩得全长
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hyde0706 at 2009-11-16 15:57:
第二次PCR的时候你的第一次PCR产物稀释了多少倍?模板大多也是对扩增有抑制的。

我做过胶回收产物稀释1倍、10倍、20倍和50倍的  由于是大片段胶回收的效率也不高  跑胶条带段很淡,大概7-8ng/ul。但也没扩出来过
10楼2009-11-16 16:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

微毛虫

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):降解后还可以扩出来么? 11-16 17:41
RNA很容易降解的,你看看是不是降解了~
踮起脚尖才能更接近阳光
2楼2009-11-16 12:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自强8638

铜虫 (初入文坛)


1949stone(金币+1,VIP+0):有可能 11-16 17:40
可能杂质太多了,影响了酶的活性吧,要不再提纯一下试试。
biotechnology
3楼2009-11-16 12:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢各位仁兄,我们第一次用Trizol提的RNA确实不好  有降解  但能P出来,可后面提得RNA感觉要比第一次的好  可就是扩不出全长  扩几K的小片段还是没问题的。
4楼2009-11-16 13:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +13 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 14/700 2026-04-12 18:40 by laoshidan
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 327求调剂 +5 拾光任染 2026-04-06 5/250 2026-04-12 02:29 by 秋豆菜芽
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 材料与化工调剂 10+11 下一站上岸@ 2026-04-10 36/1800 2026-04-11 10:26 by 89436494
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +6 祁柒连 2026-04-06 6/300 2026-04-10 11:10 by Roomoo
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 一志愿南科大生物学297分,求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 328求调剂 +4 ghhh88888 2026-04-06 5/250 2026-04-07 14:45 by ghhh88888
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见