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扩PCR的问题
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最近在做构建，难免要扩菌液PCR来验证阳性菌，我的习惯是在扩pcr的时候加一个阴性对照，也就是空白对照，里面只有pcr的预混，没有菌液模板，但是最近的结果很是令人苦恼，每次扩pcr的时候，阴性对照总是能扩出条带来，而且和阳性菌的目的带是一个大小，我换了好几个模板，用的是各自的引物，但是结果总是这样，阴性对照的上样道总是有目的带。但是有时候把扩的有阳性带的菌摇起来提质粒后却发现这个是假阳性。搞的我工作做了很多，都是白做。我已经排除了taq酶，buffer，水（换新的）和引物（换用质粒模板正常）的污染了。我每次都是把预混配好，然后分装到各管。最后加菌液模板。现在很头疼到底是哪里出了问题 哪位大侠能帮忙分析一下？？ |
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