24小时热门版块排行榜    

查看: 1259  |  回复: 11
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 扩PCR的问题

最近在做构建,难免要扩菌液PCR来验证阳性菌,我的习惯是在扩pcr的时候加一个阴性对照,也就是空白对照,里面只有pcr的预混,没有菌液模板,但是最近的结果很是令人苦恼,每次扩pcr的时候,阴性对照总是能扩出条带来,而且和阳性菌的目的带是一个大小,我换了好几个模板,用的是各自的引物,但是结果总是这样,阴性对照的上样道总是有目的带。但是有时候把扩的有阳性带的菌摇起来提质粒后却发现这个是假阳性。搞的我工作做了很多,都是白做。我已经排除了taq酶,buffer,水(换新的)和引物(换用质粒模板正常)的污染了。我每次都是把预混配好,然后分装到各管。最后加菌液模板。现在很头疼到底是哪里出了问题
哪位大侠能帮忙分析一下??
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqsvery

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你在配体系的时候,那些样品是否被污染了?你换一下试剂盒试试!
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
6楼2009-11-16 14:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

j2

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-16 09:53
但是有时候把扩的有阳性带的菌摇起来提质粒后却发现这个是假阳性。
没太懂
电泳的时候没有阳性溢到阴性空里面吧~
修炼ing,当虫仙……
2楼2009-11-16 09:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fykxy_206

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):有道理 11-16 09:53
这个最大的问题就在你的电泳槽里的电泳液了。是不是很久没有换了?下次换下电泳液,加样的时候可以在外面加好样再小心的放进电泳槽里面。总之不要溢出来。这样的话就应该没有问题了。

再有就是你的PCR管是不是带有污染的?用手碰过吗?加样是在无菌操作间进行的吗?
3楼2009-11-16 09:41:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)

这个 我都不用阴性对照的
colony pcr有时候不准 不行你就酶切吧
然后如果还是没有阳性菌的话 就再连一次
连之前检查一下vector 我上次做的时候vector别人给的 根本就不对
5楼2009-11-16 10:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见