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liyong1981

金虫 (正式写手)


[交流] 质粒酶切!

我直接不酶切跑电泳,和用ECORI酶切(单酶切位点),跑出来的大小有差别么?就是环状的质粒和线性的DNA片段,在琼脂糖胶上的观察有差异么》?

[ Last edited by amisking on 2009-11-14 at 22:21 ]
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-14 20:37
我认为是一样的,琼脂糖跑出来是bp的大小,单酶切的话,环状的和线性的碱基数没有变化,条带应该是一样的。
2楼2009-11-14 16:30:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-14 20:38
构象不一样,理论上会有差别
但是也得考虑你配的胶的浓度,涉及分辨率的问题
3楼2009-11-14 16:47:45
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)

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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 11-14 20:38
有,环状的比线性的跑得快!!!
4楼2009-11-14 16:51:38
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liyong1981

金虫 (正式写手)


我用的PET-20b的质粒,做的RCORI的单酶切,但很奇怪怎么跑出来有两条带呢?请大家分析下原因?
5楼2009-11-14 16:58:48
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liyong1981

金虫 (正式写手)


这个质粒只有一个ECORI的酶切位点
6楼2009-11-14 16:59:11
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)

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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 11-14 20:39
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-14 16:58:
我用的PET-20b的质粒,做的RCORI的单酶切,但很奇怪怎么跑出来有两条带呢?请大家分析下原因?

酶切不完全,一部分切开了,一部分没切开,适当延长时间会是适当改改各部分比例!!
7楼2009-11-14 17:00:34
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liyong1981

金虫 (正式写手)


有可能,多谢,
8楼2009-11-14 17:05:29
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liyong1981

金虫 (正式写手)


会不会是因为双链的环状质粒只被切开了单链?就像一个字母Q
9楼2009-11-14 17:14:22
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-14 17:14:
会不会是因为双链的环状质粒只被切开了单链?就像一个字母Q

那就是3种情况:1,完全没切开;2,切开一单链;3,切开双链。
你可以用两个点marker跑一下,就知道怎么回事了
10楼2009-11-14 22:05:29
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