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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切！
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liyong1981

金虫 (正式写手)

[交流] 质粒酶切！

我直接不酶切跑电泳，和用ECORI酶切(单酶切位点)，跑出来的大小有差别么？就是环状的质粒和线性的DNA片段，在琼脂糖胶上的观察有差异么》？

[ Last edited by amisking on 2009-11-14 at 22:21 ]
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1楼 2009-11-14 16:03:36
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-14 20:37
我认为是一样的，琼脂糖跑出来是bp的大小，单酶切的话，环状的和线性的碱基数没有变化，条带应该是一样的。
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2楼2009-11-14 16:30:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-14 20:38
构象不一样，理论上会有差别
但是也得考虑你配的胶的浓度，涉及分辨率的问题
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3楼2009-11-14 16:47:45
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)
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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 11-14 20:38
有，环状的比线性的跑得快！！！
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4楼2009-11-14 16:51:38
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liyong1981

金虫 (正式写手)
我用的PET-20b的质粒，做的RCORI的单酶切，但很奇怪怎么跑出来有两条带呢？请大家分析下原因？
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5楼2009-11-14 16:58:48
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liyong1981

金虫 (正式写手)
这个质粒只有一个ECORI的酶切位点
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6楼2009-11-14 16:59:11
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)
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1949stone(金币+2,VIP+0):同意 11-14 20:39
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-14 16:58:
我用的PET-20b的质粒，做的RCORI的单酶切，但很奇怪怎么跑出来有两条带呢？请大家分析下原因？

酶切不完全，一部分切开了，一部分没切开，适当延长时间会是适当改改各部分比例！！
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7楼2009-11-14 17:00:34
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liyong1981

金虫 (正式写手)
有可能，多谢，
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8楼2009-11-14 17:05:29
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liyong1981

金虫 (正式写手)
会不会是因为双链的环状质粒只被切开了单链？就像一个字母Q
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9楼2009-11-14 17:14:22
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)
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引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-11-14 17:14:
会不会是因为双链的环状质粒只被切开了单链？就像一个字母Q

那就是3种情况：1，完全没切开；2，切开一单链；3，切开双链。
你可以用两个点marker跑一下，就知道怎么回事了
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10楼2009-11-14 22:05:29
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