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刘仕博

金虫 (著名写手)

[交流] 引物设计的问题及关于引物测试~

我一般都是用引物设计的软件找引物的。最近有的基因的序列特别短,用软件根本就找不到它的引物,请问下我要怎么办呀?

才开始接触real time-PCR的实验,而且因为不是这个专业的,所以完全没有基础。
我最近在做引物测试的实验。我用的方法是每个引物做5个样,把模板分别稀释5倍,25倍,125倍和625倍。请问根据结果要怎么判断这个引物是不是可以用呀?
感激不尽~
还有,我最近的一个引物在荧光和温度的曲线图里面,在最高的峰后面又多出来了一个峰,这是怎么回事情呀?

[ Last edited by louyiceng on 2009-11-14 at 16:30 ]
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生命在于折腾~
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

2楼2009-11-14 14:40:24
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刘仕博

金虫 (著名写手)

我做的是real time-PCR,和一般的PCR对引物的要求可能有点不一样,但具体哪里不一样我也不知道,所以不敢自己瞎找。。。
还请赐教!
生命在于折腾~
3楼2009-11-14 15:17:33
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顶一下

4楼2009-11-14 16:31:32
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刘仕博

金虫 (著名写手)

感动死啦!!!!
谢谢~
生命在于折腾~
5楼2009-11-14 17:28:59
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1. 软件找不到它的引物,那只能手工设计引物了。
2. 在荧光和温度的曲线图里面,在最高的峰后面又多出来了一个峰,这是引物二聚体,说明引物不是很理想,视二聚体的强度判断是否需要换引物
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
6楼2009-11-15 21:37:19
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刘仕博

金虫 (著名写手)

非常感谢!!!
生命在于折腾~
7楼2009-11-15 22:45:27
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