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新虫 (小有名气)

[交流] 科研党必看!体外模拟缺血缺氧,OGD/R造模全步骤整理好啦~

一、实验前准备

- 细胞:对数生长期,汇合度80%–90%
?
- 试剂:无糖DMEM、PBS、双抗
?
- 环境:三气培养箱/厌氧罐

二、标准操作流程

1.?弃原培养基,预热PBS轻洗1–2次
?
2.?模型组换无糖DMEM,对照组换完全培养基
?
3.?放入缺氧环境:95%N?+5%CO?,O?<0.5%
?
4.?按细胞类型孵育:
?
- 神经元:2–6h
?
- 心肌/肾小管:4–8h
?
5.?复氧复糖(OGD/R):换回正常完全培养基,常规培养6–24h

三、关键避坑要点

? 全程无菌+37℃预热,减少细胞应激
? 无糖培养基严格无葡萄糖
? 缺氧环境密封稳定,中途不开箱
? 先做预实验摸最佳时间

四、常用检测

CCK-8、LDH、流式凋亡、WB、免疫荧光…
照着做,模型稳定不翻车?
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