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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接的问题
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铁虫 (初入文坛)

[交流] 连接的问题

用T4连接酶连接目的片段和载体，载体大小为10kb,觉得大小较大，是不是连接的时间应该延长？另外，看到有人放在4度连接，连接的时间和16度应该一样吗？
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1楼 2009-11-12 09:52:34
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-14 22:20
本人也不是很懂，好像听本实验室的师兄们说放16度的时间比放4度的时间短，一般他们做时放16度连接10个小时。另外，载体的大小没有很大关系，只要你的目的片段不是特别大就可以了
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做个有风度的人
2楼2009-11-12 10:03:30
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zxx0914

金虫 (小有名气)
★
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一般在16度吧，载体大小没有关系吧，一般连接都没问题
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3楼2009-11-12 10:20:09
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
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可以适当延长连接时间，但是还是16度好，4度酶活低，连的慢
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4楼2009-11-12 11:05:01
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★
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16度 16~24小时 效果最好。37度一小时也可以
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
5楼2009-11-12 11:08:52
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★
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16度效果比较好，连接时间可适当延长！
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6楼2009-11-12 12:54:39
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)
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amisking(金币+11,VIP+0): 11-14 22:21
amisking(金币-10,VIP+0):给我多了 11-14 22:21
看连接酶的说明书吧，我们有4度连接。16度连接
有的酶要连接过夜，也有半小时就行的！！
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7楼2009-11-14 22:19:20
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proteinwang

铜虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-16 11:30
连接酶采用说明书介绍的温度即可，一般是16-22度；连接效率的高低，连接酶固然起到了很重要的作用，载体与目的片段的比例也是非常重要的，某种程度上讲后者更重要，很多书籍或资料介绍目的片段与载体之间的分子比要大于3，经验所得比例可以大于10，这是链接效率更高！
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8楼2009-11-15 16:18:21
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担菜书生

金虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-16 11:31
我一般在四度的时候时间更长一些
十六度的话十个小时，之所以用过一次四度，是因为中间有事，用四度连接了一天，结果还行吧
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9楼2009-11-15 17:05:47
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qianggene

铜虫 (小有名气)
★
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在16度连接5个小时就足够了，16度连接效率是很高的！
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10楼2009-11-15 17:19:24
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