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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我要表达的一个酶分子量小了好几KD,为什么?
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 我要表达的一个酶分子量小了好几KD,为什么?

我最近用PET系统表达了一个蛋白酶,分子量比预计的小了好几KD,我去掉了酶蛋白自身信号肽,只表达后面的结构基因部分,而且活性也不高,请教一下是由于信号肽位置选择的问题还是蛋白酶具有细胞毒性的原因呢?如何才能修正这个问题?谢谢相告!
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1楼 2009-11-11 23:15:12
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zaiguo

银虫 (初入文坛)
★
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如果是用原核表达酶的话，问题很多的，是不是你的酶不稳定，还有可能是被原核中的其他酶降解，
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5楼2009-11-12 11:39:44
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
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通过什么判断的？要是SDS-PAGE的话是不准的。
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2楼2009-11-12 09:01:13
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
就是SDS-PAGE 胶跑的,可测活性也是几乎没有啊
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3楼2009-11-12 10:06:44
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heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
SDS-PAGE不准 酶活的话可能与你提取的方法有关
如果你的是真核的蛋白质的话 用大肠菌表达有时候也会有没有活性的情况
酶比较敏感 提取的时候尽量低温
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4楼2009-11-12 10:20:45
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