| 查看: 1191 | 回复: 3 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
[交流]
怎么证明一个蛋白是转录因子
|
||||
|
各位战友，我最近发现了一个入核的蛋白，最近正在做这个蛋白的功能研究。我想先鉴别或者证明此蛋白是不是转录因子，因为目前还没有报过这个蛋白的入核倾向。 请问我该从哪方面入手呢？怎么证明这个蛋白是不是与DNA结合？如果结合怎么找到结合的DNA序列？ 谢谢大家。。。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 试验相关 |
» 猜你喜欢
306求调剂
已经有8人回复
-
招08考数学
已经有12人回复
-
接收2026硕士调剂(学硕+专硕)
已经有4人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有9人回复
-
306求0703调剂一志愿华中师范
已经有6人回复
-
276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历
已经有8人回复
-
材料与化工考研调剂
已经有3人回复
-
081700 调剂 267分
已经有3人回复
-
一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂
已经有3人回复
-
336化工调剂
已经有4人回复
2楼2009-11-11 09:04:35
红多多
木虫 (正式写手)
版筑饭牛的日子
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2295.5
- 红花: 7
- 帖子: 340
- 在线: 22.3小时
- 虫号: 303085
- 注册: 2006-12-03
- 专业: 生物化学
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
呵呵 1你要纯化蛋白并对其进行序列和结构分析， 2你要将蛋白的和DNA的结合部位找到（ChIP可以做到，需要的是能制备蛋白的抗体） 3 酵母单杂交，在报告基因上游克隆你的蛋白结合的启动子，将你的目标蛋白加入体系看能否表达，表达就说明是转录因子，否则不是。 当然，可能你的目标蛋白不能和DNA结合，那么你在做ChIP的时候就会发现没有DNA与蛋白的结合，也可能你的蛋白只和DNA结合但不能激活转录的起始，这就需要你通过蛋白的结构将蛋白质的DNA结合区与一广谱转录激活因子结合，从而验证其功能。 ChIP：染色体免疫共沉淀 第一步：用甲醛在体内将DNA结合蛋白与DNA交联 第二步：分离染色体（质），剪切后的DNA小片段与结合蛋白结合 第三步：用特异性抗体与DNA结合蛋白结合，用沉淀法分离复合体。反向交联操作释放出DNA，并消化蛋白质 第四步：用PCR扩增特异DNA序列，以确定是否与抗体共沉淀 |
3楼2009-11-11 09:32:15
4楼2009-11-12 16:36:47
