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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR反应体系参数设置
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gydgs033

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应体系参数设置

弱弱的问一下。
1。最近看了些PCR相关的文章，体系设置参数时最后都有一个72℃延伸10 min或5min.作用是什么呢？
如下面这个体系：95℃ 预变性4 nfin；95 oC变性30 s，52 oC退火30 s，72℃ 延伸30 S，30个循环，72℃延伸10 min。
2。另外，在跑DNA琼脂糖电泳时，加多少电压比较合适呢，文献给的是5V/CM.我们实验室用的是80～100V的电压，按距离换算也换算不到这个，还有，我们的电压为什么总是在波动呢，而且用了稳压器也不管用，师兄说这个没关系，请教高手解答一下
3。我们跑的电泳经常所有的条带不是同时入电泳液，但又必须等到跑的最慢的快入水才能关电泳仪，怎么解决这个问题呢
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1楼 2009-11-10 21:02:59
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★ ★
gydgs033(金币+2,VIP+0):谢谢指教，还是不太明了，能否再回答细点 11-11 20:36
1延伸是为了更好的聚合，五分 十分 都是有实验依据的 你要做实验在得出 一般用十分钟
2电压你给出的就可以，不过不建议用高电压，发热厉害。电压不稳又是波动很正常，不用在意
3跑的时间久一点啊
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海纳百川止于至善
2楼2009-11-10 22:08:56
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mcl49510

铜虫 (小有名气)
★
gydgs033(金币+1,VIP+0):谢谢 11-11 20:36
1我觉得是为了使可能在循环中没有合成完的DNA再最后10min的延伸中合成为完整的，提高产量。
2你们是不是用的横流，不是恒压啊？
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3楼2009-11-11 01:55:50
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gydgs033

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 1949stone at 2009-11-10 22:08:
1延伸是为了更好的聚合，五分 十分 都是有实验依据的 你要做实验在得出 一般用十分钟
2电压你给出的就可以，不过不建议用高电压，发热厉害。电压不稳又是波动很正常，不用在意
3跑的时间久一点啊

关于问题1：如果是为了更好的聚合，那应该在每一轮之后都延伸10分钟或5分钟呀，为什么所有的体系都是最后才72度延伸10分呢？
问题3：如果跑的太久，会不会最先入水的条带跑出凝胶，而最后一条还没入水呢？有没有什么办法可以让各条带同时入水呢？
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4楼2009-11-11 20:35:45
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六妖妖

金虫 (正式写手)
我只是不太明白lz的第三个问题。什么叫同时入水？为什么要同时入水？lz做PCR的目的是什么？
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5楼2009-11-12 10:19:45
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