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汕头大学海洋科学接受调剂
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houcaixia

金虫 (小有名气)

[交流] 镍离子柱的平衡液和洗脱液

大侠们好,我刚刚接触到蛋白纯化这方面,用的是镍离子柱,请教一下平衡缓冲液和洗脱液怎么配,谢谢
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Bartender

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般的说,缓冲液可以用20mM Tris,0.5M NaCl,8M 尿素。

咪唑缓冲液先配个3M的咪唑,然后稀释着用,大概一般用50mM,100mM,150mM,200mM,最后用300mM的冲一下。

做的时候摸一下自己要纯化蛋白的条件。

以上都是我们实验室用的NI柱的数据,你再看看你们的说明书。
5楼2009-11-10 17:30:27
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-10 17:03
你买 NI基质的时候 会有说明书,每个公司的配方会有点不同。一般都是根据咪唑的浓度变化来洗脱的。
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
2楼2009-11-10 17:02:05
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houcaixia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2009-11-10 17:02:
你买 NI基质的时候 会有说明书,每个公司的配方会有点不同。一般都是根据咪唑的浓度变化来洗脱的。

谢谢你类,我回去看看是什么公司生产的,一般咪唑的浓度是多大?还是根据柱子需要来决定咪唑的浓度啊?
3楼2009-11-10 17:06:48
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般 3个 步骤地洗脱   分别A B  C 三种 洗脱
A 不加米做
B 20~50mm
C  250~1000mm都行  这个要看你的蛋白与基制的结合程度来看 来具体话
  反正你开始做了之后 你会发现更多的问题 祝你顺利
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
4楼2009-11-10 17:16:39
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