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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍离子柱的平衡液和洗脱液
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houcaixia

金虫 (小有名气)

[交流] 镍离子柱的平衡液和洗脱液

大侠们好，我刚刚接触到蛋白纯化这方面，用的是镍离子柱，请教一下平衡缓冲液和洗脱液怎么配，谢谢
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1楼 2009-11-10 17:00:09
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-10 17:03
你买 NI基质的时候 会有说明书，每个公司的配方会有点不同。一般都是根据咪唑的浓度变化来洗脱的。
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
2楼2009-11-10 17:02:05
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houcaixia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2009-11-10 17:02:
你买 NI基质的时候 会有说明书，每个公司的配方会有点不同。一般都是根据咪唑的浓度变化来洗脱的。

谢谢你类，我回去看看是什么公司生产的，一般咪唑的浓度是多大？还是根据柱子需要来决定咪唑的浓度啊？
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3楼2009-11-10 17:06:48
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般 3个 步骤地洗脱   分别A B  C 三种 洗脱
A 不加米做
B　２０～５０mm
C  250~1000mm都行　　这个要看你的蛋白与基制的结合程度来看　来具体话
  反正你开始做了之后　你会发现更多的问题　祝你顺利
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
4楼2009-11-10 17:16:39
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Bartender

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般的说，缓冲液可以用20mM Tris，0.5M NaCl，8M 尿素。

咪唑缓冲液先配个3M的咪唑，然后稀释着用，大概一般用50mM,100mM,150mM,200mM,最后用300mM的冲一下。

做的时候摸一下自己要纯化蛋白的条件。

以上都是我们实验室用的NI柱的数据，你再看看你们的说明书。
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5楼2009-11-10 17:30:27
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般有三个步骤，
首先：不含有咪唑  平衡用的
其次： 含有20-50mM的，由于洗脱杂蛋白
最后：梯度洗脱，主要是用于获得目的蛋白，这根据你的蛋白的结合程度来判断
前面的可以不变，后面的需要自己摸索
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6楼2009-11-10 18:58:38
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houcaixia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2009-11-10 17:16:
一般 3个 步骤地洗脱   分别A B  C 三种 洗脱
A 不加米做
B　２０～５０mm
C  250~1000mm都行　　这个要看你的蛋白与基制的结合程度来看　来具体话
  反正你开始做了之后　你会发现更多的问题　祝你顺利

谢谢你哦，我这两天就开始做了，有问题再向您请教。
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7楼2009-11-11 08:43:12
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houcaixia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Bartender at 2009-11-10 17:30:
一般的说，缓冲液可以用20mM Tris，0.5M NaCl，8M 尿素。

咪唑缓冲液先配个3M的咪唑，然后稀释着用，大概一般用50mM,100mM,150mM,200mM,最后用300mM的冲一下。

做的时候摸一下自己要纯化蛋白的条件。

以 ...

谢谢你哦，我这两天就开始做了，有问题再向您请教。
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8楼2009-11-11 08:44:55
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houcaixia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tiani_tan at 2009-11-10 18:58:
一般有三个步骤，
首先：不含有咪唑  平衡用的
其次： 含有20-50mM的，由于洗脱杂蛋白
最后：梯度洗脱，主要是用于获得目的蛋白，这根据你的蛋白的结合程度来判断
前面的可以不变，后面的需要自己摸索

谢谢。
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9楼2009-11-11 08:45:51
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