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缺3种=白忙活:20种氨基酸才是实验室硬通货,17种已经out了吗?已有3人参与
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导师拍着那台比我爸岁数还大的氨基酸分析仪,语重心长:“这台机器,可是咱们实验室的元老成员,好好维护保养啊。这几个合作单位样品的氨基酸谱分析,就交给你了!” 我望着那布满按钮、管路、像极了老式计算机的庞然大物,咽了口唾沫,强行自信:“没问题!液相色谱原理我懂!” 然而,“懂原理”和“能让祖宗仪器干活”之间,隔着一道东非大裂谷。 第一关,配制流动相。不是简单的甲醇乙腈水配制有机溶剂做流动相!是柠檬酸钠、柠檬酸钾、醋酸锂等,配制盐溶液缓冲液做流动相,真是世间少有,pH还要精确到小数点后三位,还得经过0.22微米膜真空抽滤,抽滤速度,个别试剂简直是慢到家了(我去吃饭回来500mL还没抽完)。配好的流动相不能有气泡,否则基线能跳舞给你看,我守着脱气机像守着一颗炸弹。 第二关,活化柱子、平衡系统。老祖宗的脾气慢得很,开机到平衡能用掉一整天!流速慢得像滴眼泪,压力曲线稍有波动,我心率就跟着失常。师兄叮嘱:“柱子是心脏,千万不能堵!样品必须干干净净!”于是我过滤样品用的针头过滤器比样品本身还贵,离心、稀释、再离心,处理一个样品比伺候皇帝用膳还精细。为了完成这个“光荣而艰巨”的任务,我在科研交流学术讨论3群里面潜伏了整整一周,就怕突然有问题没地方问去. 终于,战战兢兢地进了样,看着谱图中一个个出峰,我激动得快哭了。但下一秒就真哭了——峰形拖尾、分不开、保留时间飘移……问题百出。查找原因?可能是柱温波动了?缓冲液pH偏了?衍生试剂茚三酮失效了?还是我昨天开机顺序不对,惹祖宗不高兴了? troubleshooting的过程就像老中医号脉,全凭经验和玄学。 一周后,我顶着黑眼圈,看着那张终于有点人样的色谱图,我又犯难了,对标品和出峰时间,确认每个氨基酸出峰……我瘫在椅子上,感觉身体被掏空。 导师来问进度,我虚弱地举起手:“老师,元老的数据出来了,但我的灵魂快被它抽干了。下次……咱们能送外检吗?我请您喝茶……” 导师来了个三连问,让我瞬间哑口无言。 他问:“这怎么只有17种氨基酸啊?怎么不测20种呢?还缺了3个氨基酸那?被你吃啦~” |
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