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[交流]
关于棉籽基因组提取的问题
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虫友们，我现在做实验遇到个问题，大家讨论一下啊 有什么资源能分析一下啊~ 对于植物基因组提取一直都是采用CTAB的方法，但我用此方法提取棉籽的基因总是效果不好啊 有什么好办法的啊~~~~急求啊。。。 [ Last edited by amisking on 2009-11-9 at 17:42 ] |
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4楼2009-11-09 17:46:24
，步骤有哪些 2楼2009-11-09 16:54:11
| 称取100-150mg经预处理的试样，在液氮中充分研磨后装入液氮预冷的1.5mL或2mL离心管中。4℃条件下12000g离心10min,弃上清液。加入600μL或1000μL预热到65℃的裂解液，充分重悬沉淀，在65℃恒温保持40~60min。室温条件下，12000g离心10min,取上清液转至另一新离心管中。分别用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），反复抽提两次，再用氯仿/异戊醇（24：1）抽提一次。室温条件下，12000g离心10min,取上清液转至另一离心管中。加入2/3体积异戊醇，1/10体积3mol/L乙酸钠溶液（pH5.6）, -20℃放置2-3h或-80℃放置30min。在4℃条件下，12000g离心10min,弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀一次，12000g离心5min, 倒出乙醇，晾干沉淀。加入100μL 纯度为18.2的水溶解沉淀，所得溶液即为样品DNA溶液。加入3μL 浓度为1mg/mL的 RNaseA（RNA酶）, 37℃恒温保持30min。 |
3楼2009-11-09 17:45:55
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