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luckyan110

[交流] 关于棉籽基因组提取的问题

虫友们,我现在做实验遇到个问题,大家讨论一下啊 有什么资源能分析一下啊~
对于植物基因组提取一直都是采用CTAB的方法,但我用此方法提取棉籽的基因总是效果不好啊 有什么好办法的啊~~~~急求啊。。。

[ Last edited by amisking on 2009-11-9 at 17:42 ]
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小小豆豆

金虫 (小有名气)

你具体是怎么做的,步骤有哪些
2楼2009-11-09 16:54:11
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luckyan110

称取100-150mg经预处理的试样,在液氮中充分研磨后装入液氮预冷的1.5mL或2mL离心管中。4℃条件下12000g离心10min,弃上清液。加入600μL或1000μL预热到65℃的裂解液,充分重悬沉淀,在65℃恒温保持40~60min。室温条件下,12000g离心10min,取上清液转至另一新离心管中。分别用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),反复抽提两次,再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提一次。室温条件下,12000g离心10min,取上清液转至另一离心管中。加入2/3体积异戊醇,1/10体积3mol/L乙酸钠溶液(pH5.6), -20℃放置2-3h或-80℃放置30min。在4℃条件下,12000g离心10min,弃上清液,用70%乙醇洗涤沉淀一次,12000g离心5min, 倒出乙醇,晾干沉淀。加入100μL  纯度为18.2的水溶解沉淀,所得溶液即为样品DNA溶液。加入3μL 浓度为1mg/mL的 RNaseA(RNA酶), 37℃恒温保持30min。
3楼2009-11-09 17:45:55
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luckyan110

上面是我的方法 看看指点一下啊。。。
4楼2009-11-09 17:46:24
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