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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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陌默

[交流] 求租引物上酶切位点的问题!

扩增细菌的16S rDNA的通用引物,能否在上下游分别添加ECoRI和HindⅢ酶切位点啊?

上游:AGAGTTTGATCCTGG

下游:ACGGCTACCTTGTTA



就是为了细菌分类和鉴定,想做TA克隆,所以需要加酶切位点,不知上面两个酶切位点可否?

急求高手指点!
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by 陌默 at 2009-11-10 12:24:

我还有一个问题,我扩增的条带,16S,1500bp左右,连接到T载体上,酶切怎么看最后的电泳的长度是否正确呢?我不太会看载体上的相关东西哦····

点maker啊,如果切动的话,是重组质粒就会出两条带,分别为3kb(T 载)左右和1.5kb(目的片段)左右。
Thank-you,so-blue.
12楼2009-11-10 12:30:55
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查看全部 14 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

既然做TA克隆为何还要在引物上面加酶切位点?
2楼2009-11-09 13:08:09
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jjlbest

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-10 12:38
我也想问的是1楼的问题,连接T载体是不需要酶切位点的,普通的Taq酶扩增后自动在DNA的3‘端加上一个A。可直接与Tvector连接的,如用高保真酶如Primerstar,扩增后的DNA产物无A,只要加上A尾就可以了,一般情况下,要进行定位克隆时才用到酶切位点的e
3楼2009-11-09 13:44:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

我想楼主大概希望TA克隆后筛重组子用双酶切鉴定下。这样没必要,可以直接做PCR鉴定,即使酶切鉴定的话,T载上也有现成的酶切位点。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-11-09 14:18:39
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