24小时热门版块排行榜    

查看: 909  |  回复: 13
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 陌默 的 2 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

陌默

[交流] 求租引物上酶切位点的问题!

扩增细菌的16S rDNA的通用引物,能否在上下游分别添加ECoRI和HindⅢ酶切位点啊?

上游:AGAGTTTGATCCTGG

下游:ACGGCTACCTTGTTA



就是为了细菌分类和鉴定,想做TA克隆,所以需要加酶切位点,不知上面两个酶切位点可否?

急求高手指点!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


陌默(金币+1,VIP+0): 11-10 12:21
引用回帖:
Originally posted by 陌默 at 2009-11-9 21:06:

对,我就是要筛重组子,所以想用PCR和酶切鉴定,觉得这样保险点啊。我就想知道,我能不能用EcoRI 和HindⅢ来做酶切呢??

可以的,T载上有这两个酶切位点。
Thank-you,so-blue.
10楼2009-11-10 09:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

既然做TA克隆为何还要在引物上面加酶切位点?
2楼2009-11-09 13:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjlbest

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-10 12:38
我也想问的是1楼的问题,连接T载体是不需要酶切位点的,普通的Taq酶扩增后自动在DNA的3‘端加上一个A。可直接与Tvector连接的,如用高保真酶如Primerstar,扩增后的DNA产物无A,只要加上A尾就可以了,一般情况下,要进行定位克隆时才用到酶切位点的e
3楼2009-11-09 13:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

我想楼主大概希望TA克隆后筛重组子用双酶切鉴定下。这样没必要,可以直接做PCR鉴定,即使酶切鉴定的话,T载上也有现成的酶切位点。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-11-09 14:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +14 医学老男孩 2026-08-13 34/1700 2026-08-14 09:21 by xiaruohan
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +4 启萌科技 2026-08-12 12/600 2026-08-14 09:07 by switchoff
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 30/1500 2026-08-14 07:55 by 医学老男孩
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见