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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 最近做连接时出现了问题,请各位大虾帮帮忙?

小弟最近做连接时,在载体Xbal I 位点连入了一片段,现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段,但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉,请问各位大虾 怎么解决这一问题啊
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2009-11-9 10:40:
小弟最近做连接时,在载体Xbal I 位点连入了一片段,现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段,但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉,请问各位大虾 怎么解决这一问题啊

你还是先把两个目的片段连接起来吧,然后一次性插入进去,或者考虑用别的酶做第二次连接,最王道的办法就是把你第二次要插入的片段加个接头,然后爱用什么酶切用什么酶切
可以用QQ找我……
2楼2009-11-09 10:49:08
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)

如果XbaI和HinIII之间的距离超过100bp 可以用“部分酶切”的方法来进行双酶切。
如果距离太小就最好按照LS所说的 先连接 两目的片段再连到载体中。
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
3楼2009-11-10 10:44:48
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