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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

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[交流] 最近做连接时出现了问题，请各位大虾帮帮忙？

小弟最近做连接时，在载体Xbal I 位点连入了一片段，现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段，但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉，请问各位大虾怎么解决这一问题啊

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1楼 2009-11-09 10:40:55

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引用回帖:

Originally posted by huangdi07 at 2009-11-9 10:40:
小弟最近做连接时，在载体Xbal I 位点连入了一片段，现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段，但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉，请问各位大虾怎么解决这一问题啊

你还是先把两个目的片段连接起来吧，然后一次性插入进去，或者考虑用别的酶做第二次连接，最王道的办法就是把你第二次要插入的片段加个接头，然后爱用什么酶切用什么酶切