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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 最近做连接时出现了问题，请各位大虾帮帮忙？
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 最近做连接时出现了问题，请各位大虾帮帮忙？

小弟最近做连接时，在载体Xbal I 位点连入了一片段，现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段，但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉，请问各位大虾 怎么解决这一问题啊
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1楼 2009-11-09 10:40:55
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2009-11-9 10:40:
小弟最近做连接时，在载体Xbal I 位点连入了一片段，现在想在XbalI
和HinIII位点再连入一片段，但是对该载体做XbalI和HinIII双酶切时会把我已经连入到XbalI位点的片段切掉，请问各位大虾 怎么解决这一问题啊

你还是先把两个目的片段连接起来吧，然后一次性插入进去，或者考虑用别的酶做第二次连接，最王道的办法就是把你第二次要插入的片段加个接头，然后爱用什么酶切用什么酶切
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可以用QQ找我……
2楼2009-11-09 10:49:08
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
如果XbaI和HinIII之间的距离超过100bp 可以用“部分酶切”的方法来进行双酶切。
如果距离太小就最好按照LS所说的 先连接 两目的片段再连到载体中。
赞一下 回复此楼
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
3楼2009-11-10 10:44:48
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