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keer881

[交流] 蛋白表达温度问题

为何蛋白必须低温诱导才能表达 ?具体原理是什么?
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keer881

我是用大肠杆菌PET-28a表达的重组蛋白,带有His标签。用BL21不能表达,只能在Rosseta中的表达,表达时我做过几个温度,37度和30 度都不表达,只能25度过夜才能表达。表达量一般,超声后位于上清。我知道一般表达量很高,位于沉淀的蛋白为了减慢折叠速度才低温诱导,为什么我的只有低温才能表达呢?谢谢
9楼2009-11-18 21:13:57
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quiller2000

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 11-8 22:09
不知道你是指什么
在我们组,一般的可溶性蛋白表达并不需要低温诱导;但是如果你得到的蛋白可溶性不高或者根本在PAGE上看不到显著的蛋白条带;那才采用低温诱导,减低诱导剂用量等策略

据说当细胞的生长速率低的时候,有利于蛋白质充分折叠;而更低的蛋白量也保证该蛋白在细胞内的折叠或减低对宿主的毒性!
致良知
2楼2009-11-08 22:06:26
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by quiller2000 at 2009-11-8 22:06:
不知道你是指什么
在我们组,一般的可溶性蛋白表达并不需要低温诱导;但是如果你得到的蛋白可溶性不高或者根本在PAGE上看不到显著的蛋白条带;那才采用低温诱导,减低诱导剂用量等策略

据说当细胞的生长速率低 ...

有点意思
小木虫之有关部门负责人
3楼2009-11-08 22:18:10
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
大多数情况下是不必的,但是有些蛋白折叠问题比较多,最好低温表达。但还请楼主注意,要知道此分泌蛋白是胞内蛋白还是胞外蛋白?也就是说,表达出来有没有包涵体
4楼2009-11-08 22:55:50
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