| 查看: 452 | 回复: 2 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
[交流]
【求助】a淀粉酶最适温度的测定以及温度耐受性的测定 实验方案
|
||||
| 大家帮帮忙哦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
我不理解！
已经有27人回复
-
要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够
已经有16人回复
-
基金系统什么内容也没有
已经有10人回复
-
科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题
已经有8人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有5人回复
-
梦想
已经有8人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19837.5
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6622
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对吻鱼(金币+2,VIP+0):鼓励应助~~欢迎常来化工版^_^ 12-11 12:20
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对吻鱼(金币+2,VIP+0):鼓励应助~~欢迎常来化工版^_^ 12-11 12:20
|
摘录自我写的专利，供参考 三、青霉（Penicillium）淀粉酶的最适作用温度 将粗酶液稀释至5倍体积，作为待测酶液A；将粗酶液稀释至5倍体积，煮沸5min灭活，作为待测酶液B（空白对照）。 1、将可溶性淀粉溶于pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液（每100毫升溶液中含有0.25克可溶液淀粉）。 2、在350µL淀粉溶液中加入50µL待测酶液，分别在15-70℃（以5℃作为温度梯度）反应15min。 3、加两倍体积DNS终止反应并煮沸5min显色。 4、测定540 nm 的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。 将待测酶液的酶活力乘以稀释倍数，得到粗酶液的酶活力。粗酶液的酶活力为：15.45 U/mL（15℃）、19.10 U/mL（20℃）、22.81 U/mL（25℃）、30.00 U/mL（30℃）、33.87 U/mL（35℃）、35.96 U/mL（40℃）、37.25 U/mL（45℃）、33.34 U/mL（50℃）、25.71 U/mL（55℃）、17.09 U/mL（60℃）、11.20 U/mL（65℃）、5.47 U/mL（70℃）。 以最高酶活力作为100％，其他温度的酶活力折算为相对于最高酶活力的相对酶活力。以温度为横坐标，相对酶活力为纵坐标作图，见图6。 结果表明，青霉淀粉酶的最适作用温度约为45℃。 四、青霉（Penicillium）淀粉酶的温度耐受性 将粗酶液稀释至4倍体积，作为酶液A；将粗酶液稀释至4倍体积，煮沸5min灭活，作为酶液B（空白对照）。取若干份酶液A，分别在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃下保温1-6h；同样，取若干份酶液B，分别在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃下保温1-6h。 1、将可溶性淀粉溶于pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液，各淀粉溶液中淀粉的终浓度均为0.25%（每100毫升溶液中含有0.25克可溶液淀粉）。 2、每350µL淀粉溶液中加入50µL不同温度处理后酶液，30℃反应1小时。 3、加两倍体积DNS终止反应并煮沸5min显色。 4、测定540 nm 的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。 将待测酶液的酶活力乘以稀释倍数，得到粗酶液的酶活力。粗酶液的酶活力为： 35℃处理1h:30.00 U/mL、2h: 29.96 U/mL、3h: 30.00 U/mL、4h: 30.00 U/mL、5h: 29.38 U/mL、6h: 29.18 U/mL；40℃处理1h:23.81 U/mL、2h: 21.48 U/mL、3h: 20.71 U/mL、4h: 16.84 U/mL、5h: 14.12 U/mL、6h: 12.88 U/mL；45℃处理1h:5.64 U/mL、2h: 2.24 U/mL、3h: 0 U/mL；50℃处理1h:1.29 U/mL、2h:0U/mL 以步骤一测定的粗酶液的酶活力作为100%，将不同温度和时间处理后酶液的酶活力折算为相对酶活力。以温度为横坐标，相对酶活力为纵坐标作图，见图7。 结果表明，青霉淀粉酶在40℃保温1h后活性开始稍有丧失，在50℃保温1h后活性几乎全部丧失，说明该淀粉酶对温度比较敏感。 在做温度耐受性时可以考虑将淀粉酶加到某一pH值的缓冲液中，测定在该pH值下的温度耐受性。 |
2楼2009-12-09 22:44:31
3楼2010-01-10 17:40:33
20